Методика работы

С помощью водного сачка проводится отлов моллюсков, обитающих в водоеме. Все выловленные моллюски идентифицируются по видам, и за­тем определяется сапробность водоема. К α-мезосапробам относится роговая шаровка (рис. 8.2 (1)). β-мезосапробами являются обыкновен­ный прудовик (рис. 8.2 (2)), ушковый прудовик (рис. 8.2 (3)), физа ключе­вая (рис. 8.2 (4)), яйцевидный прудовик (рис. 8.2 (5)), лужанка настоящая (рис. 8.2 (6)), лужанка полосатая (рис. 8.2 (7)), битиния щупальцевая (рис. 8.2 (8)), горошина (рис. 8.2 (9а,б)), перловица вздутая (рис. 8.2 (12а,б)). Типичными олигосапробами являются катушка обыкновенная (рис. 8.2 (10а,б)), катушка килевая (рис. 8.2 (11а,б)), перловица живописцев (рис. 8.2 (13)), утиная беззубка (рис. 8.2 (14)), катушка гладкая (рис. 8.2 (16)), катушка завитая (рис. 8.2 (15)).

8.1.3.2. Биоиндикация токсичности природных вод с помощью дафний [7, 34]

Дафнии - наиболее часто используемый тест-объект для определения токсичности воды. Метод позволяет определить токсичность сточных и природных вод. Критерием острой ток­сичности является гибель 50% и бо­лее дафний в анализируемой воде по сравнению с контролем в течение 24, 48 или 96 ч.

Культура дафний. Исходный ма­териал желательно приобрести в спе­циальных учреждениях и организациях. В школьных опытах можно исполь­зовать и свою культуру. Для этого из самого чистого в вашей местности водоема с помощью гидробиологи­ческого сачка отлавливают дафний и помещают в стеклянные емкости, которые заполняют под пробку водой из этого же водоема. Одновременно отбирают 5-10 л воды для последующей посадки дафний. Дафнии отде­ляют декантированием жидкости. Затем отобранную природную воду фильтруют через фильтр и заполняют ею подготовленные стеклянные со­суды емкостью 3-5 л примерно на одну треть объема, куда переносят дафний с помощью стеклянной трубки с внутренним диаметром 0,5-0,7 см с оплавленным концом. Начальная плотность посадки 6-10 особей на 1 л воды. Спустя 5-7 суток, в течение которых дафнии привыкают к лабораторным условиям существования и начинают размножаться, в со­суды доливают воду для дальнейшего культивирования.

При поддержании культуры в помещении не должно быть вредных га­зов и токсичных паров. Оптимальная температура 20 ± 2°С, продолжи­тельность светового дня 12-14 ч. (не освещать культуру прямыми сол­нечными лучами). Посуду для содержания дафний нельзя мыть моющими веществами и органическими растворителями, лучше мыть питьевой содой, при особом загрязнении – хромовой смесью или соляной кислотой. Для культивирования дафний используют водопроводную воду, предварительно отстоянную не менее 7 суток и насыщенную кислородом (рН = 7,0-8,2; же­сткость общая - 3-4 мг-экв./л; концентрация растворенного кислорода не менее 6,0 мг/л). Раз в 7-10 суток половину объема воды с культурой дафний заменяют на свежую, удаляют скопившийся на дне осадок и при большой плотности (более 25 самок) культуру прореживают. Не следует производить аэрацию воды в сосудах.

Кормом для дафний служат зеленые водоросли (хлорелла) и хлебопе­карные дрожжи. Для приготовления дрожжевого корма берут 1 г свежих или 0,3 г воздушно-сухих дрожжей, за­ливают их 100 мл дистиллированной воды. После набухания дрожжи тща­тельно перемешивают, дают отстоять­ся в течение 30 мин. Надосадочную жидкость добавляют в сосуды с дафниями в количестве 3 мл на 1 л воды. Кормят дафний 1-2 раза в не­делю.

Для выращивания зеленых водорослей требуется сложная методика, поэтому при возможности приобретают их в одной из лабораторий и хранят в холодильнике (срок хранения 14 суток). Вносят 1 мл суспензии водорослей на 1 л воды.

При невозможности культивирования дафний в школьном опыте можно допустить использование только что отловленных дафний.

Отбор пробы. Пробу природной (сточной) воды отбирают объемом до 1 л. До биотестирования возможно хранение ее не более 6 часов при температуре 4°С.

Далее пробу фильтруют через фильтровальную бумагу и заливают в емкости для биотестирования.

Проведение опыта. Берут 3 сосуда для исследуемой воды и 3 сосуда для контрольной пробы, не содержащей токсичных веществ. Наливают в них по 100 мл исследуемой воды и по 100 мл чистой воды для контроля. Исследуемую воду можно разбавить водой, не содержащей токсичных веществ.

Контрольную (разбавляющую) воду готовят отстаиванием в течение 7 суток водопроводной воды средней (не более 3,0 мг-экв./л) жесткости, проверяя рН (7,0-8,2), температуру (20°С), содержание кислорода (не менее 2 мг/л - при снижении делают продувку с помощью микрокомпрессора или камеры от футбольного мяча). В процессе биотестирования продувку делать не рекомендуется.

В каждый сосуд помещают по 10 особей дафний. Их переносят стеклянной трубкой диаметром 5-7 мм сначала в сачок, а затем в сосуды, погрузив его в воду.

Наблюдают за ходом эксперимента через 24, 48 или 96 часов. Дафний во время эксперимента не кормят. По окончании эксперимента проводят учет выживших дафний. Выжившими считаются дафнии, если они сво­бодно передвигаются в толще воды или всплывают со дна сосуда не по­зднее 15 с после его легкого покачивания.

Проведение подсчета. На основании полученных результатов в 3-х повторностях рассчитывают среднее арифметическое количество выжив­ших дафний в контроле и опыте. Для расчета тест-параметра - процента гибели дафний в опыте по отношению к контролю - используют формулу:

где X₁ и X₂ – среднее арифметическое количество (экз.) выживших дафний в контроле и опыте.

Проба воды оценивается как обладающая острой токсичностью, если за 24 ч. биотестирования в ней гибнет 50% и более дафний по сравнению с контролем.

Если в течение опыта в контрольном варианте произошла гибель более 10% дафний, то полученные результаты не учитывают, опыт повторяют, предварительно проверив пригодность тест-объекта для биотестирования.

При определении пригодности биообъекта для тестирования, а также для показа в демонстрационном эксперименте используют токсичное вещество - дихромат калия (К₂Сr₂O₇). В разбавленных до 1-2,5 мг/л растворах гибель дафний должна приближаться к 50%. Разбавленный раствор дихромата калия получают, добавляя 1-2,5 мл маточного раствора (1 г К₂Сr₂O₇ в 1 л дистиллированной воды) к 1 л контрольной воды.