Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника


Реакции, основанные на феномене агглютинации




Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек (носителей антигена) друг с другом. В соответствии с этим агглютинирующий эффект иммунной сыворотки может быть выявлен только в том случае, если в реакции используется корпускулярный антиген. При использовании растворимого антигена его необходимо предварительно адсорбировать на инертных носителях.

Реакция агглютинации применяется в двух вариантах:

· метод на плоскости, который позволяет дать быстрый ответ о наличии или отсутствии антител;

· пробирочный метод, который обычно используют для количественного изучения концентрации антител в сыворотке.

Метод на плоскости. На предварительно тщательно вымытую и обезжиренную поверхность предметного стекла наносят 1 каплю сыворотки и 1 каплю взвеси исследуемой культуры клеток в физиологическом растворе (концентрация культуры клеток предварительно подбирается по стандартам мутности). Сыворотку и культуру перемешивают стеклянной палочкой. При покачивании предметного стекла наблюдают появление агглютината, собирающегося в центре. При этом отдельные клетки культуры склеиваются в комочки, т.е. соединяются в более крупные конгломераты, хорошо заметные на фоне прозрачной сыворотки. Агглютинация может наступить быстро, но иногда ее появление отмечается лишь спустя 10÷15 мин. Отрицательный результат фиксируют, если клетки исследуемой культуры остаются равномерно распределенными в смеси и последняя выглядит равномерно мутной.

В качестве контроля на предметное стекло наносят 1 каплю физиологического раствора и 1 каплю исследуемой культуры клеток. Физиологический раствор и культуру перемешивают стеклянной палочкой. В контроле должно наблюдаться отсутствие агглютинации. Контроль ставится для того, чтобы проверить отсутствие спонтанной агглютинации культуры клеток в физиологическом растворе.

Пробирочный метод. В ряд пробирок, за исключением первой, вносят по 0,1 мл физиологического раствора. Затем в первую (пустую) и вторую пробирки помещают по 0,1 мл испытуемой сыворотки. Начиная со второй пробирки, переносят по 0,1 мл смеси сыворотки с физиологическим раствором из каждой предыдущей пробирки в последующую, чем достигается ряд двукратных разведений сыворотки. В контрольную пробирку заливают только физиологический раствор. Затем во все пробирки вносят по 0,1 мл взвеси исследуемой культуры клеток. Пробирки после этого встряхивают и помещают на 30 мин в термостат при 37оС. Оценка реакции производится макроскопически. При оценке интенсивности реакции агглютинации пользуются следующей схемой.

Резко выраженная агглютинация (+++). Все поле зрения дна пробирки занято единым конгломератом из склеившихся частиц.

Умеренная агглютинация (++). Часть поля зрения дна пробирки занято единым конгломератом склеившихся частиц, часть клеток остается в свободном состоянии, образуя в пробирке некоторую муть.

Слабая агглютинация (+). Среди равномерно распределенных клеток культуры видны мелкие конгломераты из склеившихся частиц.

Отсутствие агглютинации (-). Склеивания частиц не наблюдается.

Реакции, основанные на феномене преципитации.


Поделиться:

Дата добавления: 2015-04-16; просмотров: 77; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав





lektsii.com - Лекции.Ком - 2014-2024 год. (0.006 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав
Главная страница Случайная страница Контакты