Определение прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов ткани печени по качественной пробе Л. Делямуре

Прочность связи между белками и липидами в липопротеидных комплексах исследуют методом экстракции липидов серным эфиром с последующей окраской их суданом III.

Ход работы

4.1.1. Экстрагирование липопротеидов из ткани. 1 г печени растирают в ступке, прибавляют 5 мл физиологического раствора, снова тщательно растирают и оставляют стоять 30 мин, периодически перемешивая пробу. Жидкость с осадка сливают в колбочку, а остаток ткани снова растирают с 5 мл физиологического раствора. Жидкость сливают в ту же колбу, раствор фильтруют или центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают в мерный цилиндр и физиологическим раствором доводят объем до 50 мл.

4.1.2. Экстрагирование липидов серным эфиром из липопротеидного комплекса. В контрольную пробирку отмеривают 0,9 мл надосадочной жидкости из цилиндра (или сыворотки крови) и 0,1 мл физиологического раствора, в опытную пробу - 0,9 мл надосадочной жидкости из цилиндра (или сыворотки крови) и 0,1 мл 0,05% раствора тиолового яда (йодацетата). В обе пробирки приливают по 2-3 капли спиртового раствора судана-III. Пробирки встряхивают, затем добавляют по 1 мл серного эфира, снова встряхивают и оставляют стоять до расслоения жидкостей. В контрольной пробе липопротеидный комплекс не разрушается, поэтому судан-III окрашивает нижний водный слой. В опытной пробе тиоловый яд разрушает связь между белковым и липидным компонентами липопротеида, серный эфир экстрагирует липидный компонент, поэтому судан-III окрашивает верхний эфирный слой.

Результаты работы заносят в таблицу 9:

Результаты опыта Таблица 9.

6.1. Что такое липопротеиды и из каких компонентов они состоят?

6.2. Как можно подразделить липид-белковые комплексы? Какова их биологическая роль?

6.3. Какими белками представлен белковый компонент в сывороточных липопротеидах?

6.4. Каков состав простетических групп липопротеидов?

6.5. Как связаны белковый компонент и простетическая группа в липопротеидах?

6.6. В чем сходство и различия a- и b-липопротеидов, хиломикронов и пре-b-липопротеидов?

6.7. Какие классы сывороточных липопротеинов рассматриваются как атерогенные и антиатерогенные факторы?

6.8. В чем заключается метод определения прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов по качественной пробе Л.Делямуре?

6.9. На чем основан метод электрофоретического разделения сывороточных липопротеидов?

6.10. Каково клиническое значение определения a- и b-липопротеидов в сыворотке крови?

6.11. При каких патологических состояниях увеличивается доля b-липопротеидов?

6.12. Что такое гиперлипопротеинемия? Какие типы гиперлипопротеидемий Вам известны?