Основные компоненты и принцип работы иммунохроматографических тест-систем

Основные компоненты и принцип работы иммунохроматографического экспресс-теста представлены на рисунке 2.

Рис. 2 - Основные компоненты и принцип работы иммунохроматографического экспресс-теста [20].

1 – образец, содержащий аналит; 2 – конъюгат маркера с антителами; 3,4 – иммобилизированные антитела (тестовая и контрольная полосы); 5 – мембрана для образца; 6 – мембрана для конъюгата маркера с антителами; 7 – рабочая мембрана; 8 – мембрана для абсорбции реагентов (впитывающая); 9 – подложка для мембран; 10 – тестовая полоса; 11 – контрольная полоса.

Иммунохроматографический анализ с использованием тест-полосок проводят следующим образом. Исследуемый образец ресуспендируют в специальном буферном растворе, твердым частицам дают осесть в течение нескольких минут. Надосадочную жидкость вносят на мембрану для образца, под действием капиллярных сил жидкость движется вместе с жидкой фазой теста, содержащей антитела с красителем [20].

Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген, то происходит его связывание с растворимыми меченными коллоидным золотом антителами. Образованный иммунный комплекс движется далее вдоль мембраны, а в тестовой зоне связывается с жестко фиксированными антителами, образуя окрашенную полоску, свидетельствующую о наличии определяемого возбудителя в образце [20]. Свободные антитела с красителем мигрируют далее вдоль мембраны и в контрольной зоне взаимодействуют с вторичными антителами, где и наблюдается вторая окрашенная (контрольная) полоса [27]. Образование контрольной полосы подтверждает качественность применяемых в тесте реагентов. На рисунке 3 представлены варианты интерпретации результатов иммунохроматографического анализа с использованием иммунохроматографической тест-системы.

1 2 3

Рис. 3 – Интерпретация результатов [28].

1. Результат отрицательный - выявление в тестовом окошке кассеты одной контрольной линии (С), которое свидетельствует об отсутствии в анализируемом образце клеток Helicobacter pylori, либо о наличии микроорганизмов ниже уровня чувствительности тест-системы.

2. Результат положительный - в тестовом окошке кассеты визуализируются две параллельные окрашенные линии (С и Т), что свидетельствует о наличии в анализируемом образце клеток Helicobacter pylori. Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации клеток Helicobacter pylori в образце.

3. Результат недействительный - в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только одна линия в аналитической зоне (Т). Анализ следует повторить с использованием другого теста [28].

На мембране комбинированных экспресс-тестов, предназначенных для определения нескольких возбудителей одновременно, антитела разной специфичности присутствуют в виде нескольких тестовых зон. В результате анализа может окраситься несколько тестовых полос, обычно разного цвета, соответствующих присутствующему в образце возбудителю.

Одним из основных компонентов ИХ тест-систем является конъюгат окрашенных нанодисперсных частиц с моноклональными антителами.

Окрашенные наночастицы выступают в качестве маркера, обеспечивающего «визуализацию» комплекса «антиген-антитело». Свойства маркера, применяемого для разработки имунохроматографической тест-системы, во многом определяют параметры чувствительности и специфичности тест-системы [20].