Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника


Лабораторные работы




Лабораторная работа № 1.Определение содержания гемоглобина
в крови

Принцип метода. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетон-циангидрином окрашенный комплекс гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина.

Ход работы. Опытная проба: 0,02 мл крови приливают к 5 мл трансформирующего раствора (разведение крови в 251 раз), хорошо перемешивают, оставляют стоять 10 минут, после чего измеряют на колориметре при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы (трансформирующий раствор или вода).

Экстинкцию стандартного раствора измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Расчет содержания гемоглобина (в мг%) производят по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемиглобинцианида, или по формуле

Hb = (Еоп / Ест)КС ´ 0,01,

 

где Еоп – экстинкция опытной пробы;

Ест – экстинкция стандартного раствора;

С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, равная 59,75 мг%;

К – коэффициент разведения крови;

0,01 – коэффициент для пересчета мг% в г/л (в СИ).

Содержание гемоглобина в крови по норме: у женщин – 12–14 г% (120–140 г/л); у мужчин – 13–16 г% (130–160 г/л).

 

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

 

Лабораторная работа № 2.Определение общего билирубина в сыворотке крови (метод Иендрашика и Клеггорна)

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом малиново-красного цвета. Неконъюгированный билирубин вступает в "непрямую" реакцию с диазосмесью – после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива. При этом определяется концентрация "общего" билирубина. По разности концентраций "общего" и "прямого" билирубина определяют содержание "непрямого".

 

Ход работы. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:

 

Проба Сыворотка крови, мл Кофеиновый реактив, мл Дистиллир. вода, мл Диазосмесь, мл
Опытная 3,5 0,5
Контрольная 3,5 0,5

Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл диазореактива II (0,5 %-го раствора нитрата натрия) с 0,3 мл диазореактивом I (готовится в лаборатории кафедры).

Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перемешивают, ставят на 20 мин в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 500–560 нм) против контроля. Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрией содержимое обеих пробирок подщелачивают, добавляя в них по 3 капли 30 %-го раствора NaOH. При этом цвет раствора переходит в зеленый, а при большой концентрации билирубина – в синий; часто наблюдается исчезновение мути.

Расчет производят по калибровочному графику.

При оформлении работы в протокол вносят принцип метода, результат колориметрии и расчет. Отмечают пределы колебаний концентрации билирубина в норме.

Клинико-диагностическое значение. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада в клетках ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенка) гемоглобина и других гемопротеидов (цитохромы, каталаза и др.). Билирубин относится к группе желчных пигментов, является токсическим веществом и обезвреживается в гепатоцитах. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме

 

УДФ-глюкуроновая кислота

Билирубин ¾¾¾¾¾¾¾¾¾¾® Билирубин-глюкуронид.

глюкуронилтрансфераза

 

Образующиеся при этом глюкурониды билирубина хорошо растворимы в воде, секретируются в просвет желчного капилляра и выводятся из организма по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится две фракции билирубина, вместе составляющие "общий" билирубин:

- неконъюгированный (непрямой, токсичный, свободный, водонерастворимый, существует в виде комплекса с альбумином),

- конъюгированный (билирубин глюкуронид, прямой, нетоксичный, связанный, водорастворимый).

Содержание билирубина в крови в норме составляет 0,5–1,2 мг% (8,5–20,5 мкмоль/л в единицах СИ), причем 75 % приходится на долю неконъюгированного. Определение его уровня в крови является важным диагностическим тестом. Так, при различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия – увеличение концентрации билирубина до 30–35 мг% (512,5 – 600,0 мкмоль/л) и более.

Дифференциальная диагностика различных видов желтух осуществляется на основании исследования содержания фракций билирубина в крови, а также особенностей клинического течения заболевания и др.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

Рекомендуемая литература

Основная

1 Материал лекций.

2 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 65–71, 434–436, 458–464; 1998. С. 78–85, 503–508, 585, 591–599.

3 Строев Е. А. Биологическая химия. М.: Медицина, 1986.

4 Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 227–228, 428–437.

Дополнительная

5 Уайт А. и др. Основы биохимии. Т. 3. М.: Мир, 1981. С. 1218–1301.

6 Федоров Н. А. Нормальное кроветворение. М.: Медицина, 1975.

7 Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 1. С. 52–62, 356–372.

8 Зилва Дж. Ф., Пэннел Д. Клиническая химия в диагностике и лечении. М.: Медицина, 1986.

9 Руководство по клинической лабораторной диагностике. Т. 3. Клиническая биохимия / Под ред. М. А. Базарновой. Киев, 1991.


Поделиться:

Дата добавления: 2015-08-05; просмотров: 64; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав





lektsii.com - Лекции.Ком - 2014-2024 год. (0.005 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав
Главная страница Случайная страница Контакты