Программ трех занятий

1. Формы бактерий и методы их изучения.

2. Ультраструктура бактериальных клеток.

3. Простые и сложный методы окраски.

Бактерии – одноклеточные организмы, которые относятся по современной классификации Берджи (1976) к разным семействам. Они имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной деятельности. Для бактерий характерны три основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная) и извитая.

Морфологию микроорганизмов изучают в живом виде и окрашенных препаратах.

Микропрепараты готовят из патологического материала или чистой культуры бактерий, делая мазки на предметных стеклах с использованием бактериальной петли.

Этапы приготовления микропрепаратов из культуры микробов:

1) обезжирить предметное стекло (мылом или смесью Никифорова);

2) прокалить бактериальную петлю и нанести на стекло 2-3 капли физиологического раствора;

3) прокалить бактериальную петлю, обжечь край пробирки с культурой микроба, взять касательным движением петли микроорганизм из питательной среды;

4) внести микроб в физиологический раствор и равномерно распределить в нем;

5) высушить мазок на воздухе;

6) зафиксировать мазок на огне или в смеси Никифорова.

При микроскопическом методе исследования используется окраска микропрепарата. Способность мазка воспринимать краситель называется тинкториальным свойством.

Для окраски препарата в микробиологической практике используются как основные, так и кислые красители. Из основных красителей наиболее часто применяются: нейтральный красный, сафранин, фуксин (красные); генцианвиолет, метилвиолет, кристаллвиолет (фиолетовый); метиленовый синий; малахитовый зеленый, а также везувин, хризоидин (коричневые). Из кислых красителей широкое применение находят: кислый фуксин, эозин (красные), конго, пикриновая кислота (желтые), нигрозин (черный).

В бактериологии различают следующие способы окраски (рис. 1).

Способы окраски

При простом методе используется одно окрашивающее ве­щество (фуксин, метиленовая синька и др.) с экспозицией 1-2 минуты. После окрашивания краситель сливают, препарат про­мывают и высушивают. Окраска простым способом позволяет выявить наличие или отсутствие микроорганизма, его форму, расположение клеток, определить размеры.

Сложные методы окраски выявляют химические и струк­турные особенности микроорганизмов, при этом обычно после­довательно применяют несколько красителей.

Одним из самых распространенных сложных методов яв­ляется окраскамикробов по Граму. Этот метод был введен в 1884 году датским микробиологом Гансом Кристианом Грамом и является важным таксономическим признаком. Все бактерии по способности окрашиваться красителями трифенилметанового ряда в сочетании с йодом делятся на две большие группы.

К одной относятся бактерии, в клетках которых комплекс, образуемый генциановым фиолетовым и йодом, удерживается при обработке их спиртом. Такие бактерии называются грамположительными.

К другой группе относятся бактерии, не обладающие свойством удерживать комплекс и обесцвечивающиеся при обработке спиртом. Их называют грамотрицательными. Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианового фио­летового с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.