Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника


Методические указания для самостоятельной работы




Практическая работа № 21.

Тема занятия:«Методы и питательные среды для культивирования анаэробов»

Составила преподаватель Якимова Л.М.

 

 

Минск

Практическая работа № 17

Тема занятия:«Методы и питательные среды для культивирования анаэробов»

Цель занятия:познакомиться с основными методами и питательными средами для культивирования анаэробов.

 

Самостоятельная работа:

  1. Изучение устройства микроанаэростата и газогенерирующих пакетов
  2. Знакомство с питательными средами, используемыми для культивирования анаэробов
  3. Посев почвенной болтушки на среду Китт-Тароцци и на обезжиренное молоко для выделения анаэробов

 

Методические указания для самостоятельной работы

Исследование на анаэробы производят при:

  1. поражении ЦНС – абсцессы мозга, эмпиемы, менингиты.
  2. поражении сердечно-сосудистой системы – эндокардиты, сепсис, септический тромбофлебит.
  3. поражении дыхательных путей – абсцедирующая пневмония, эмпиема легких, плевры.
  4. поражении ЖКТ – интраабдоминальные генерализованные процессы, абсцессы печени, параректальные абсцессы, послеоперационные осложнения при операциях на брюшной полости, аппендицит с перитонитом.
  5. акушерско-гинекологических заболеваниях – эндометриты, абсцессы маточных труб, сепсис после аборта, абсцессы бартолиниевых желез, тазовые абсцессы.
  6. инфекциях мочевыводящих путей – пиелонефриты, циститы.
  7. поражении глаз, уха, полости рта – синуситы, отиты, периодонтиты, кариес зубов, конъюнктивиты, гингивиты.
  8. поражениях костей и суставов – остеомиелиты, артриты, бурситы.

 

Исследование на неклостридиальные анаэробы проводят при наличии хотя бы одного из следующих признаков:

1. Неприятный запах в очаге

2. Некротизация тканей и абсцедирование.

3. Локализация очага вблизи слизистой.

4. Развитие инфекции на фоне лечения аминогликозидами.

5. Черное окрашивание экссудата (привотелла,порфиромонас).

6. Септический тромбофлебит рядом с очагом

Материал для исследования зависит от очага и формы инфекции. Жидкий материал (кровь, раневое отделяемое) забирают шприцем (игла должна быть заполнена материалом и втыкается в стерильную резиновую пробку). Посев надо делать у постели больного, при невозможности – хранить и транспортировать не позже 2 часов. Кусочки органов и тканей забирают тампоном. Тампоны должны быть очень тонкими (готовят из проволоки 2 мм толщиной как бакпетля). Вата должна быть детоксицирована путем кипячения в фосфатном буфере рН 7,4 15 мин для удаления оксикислот с последующим подсушиванием в сухожаровом шкафу и автоклавировании. Кусочки органов и тканей и детоксицированные металлические тампоны увлажняют консервирующей смесью(8 частей фосфатного буфера рН 7,2-7,4 +1 часть стерильного глицерина+1 часть лизированной крови, полученной путем 5-ти кратного замораживания и последующего оттаивания флакона со стерильной кровью). Для забора материала необходима система: стерильные 3-жды увлажненные в консервирующей смеси тампоны, стерильная пробирка, стерильная трубка-проводник (изготавливается из пастеровской пипетки длиной 4-5-6 см). Систему хранят в морозильной камере 1 неделю. За 10 мин. до забора материала систему извлекают из морозильной камеры для подогрева при комнатной температуре, вставляют в рану на глубину 2 см трубку-проводник с тампоном, а затем извлекают, трубку сбрасывают, а тампон помещают в стерильную пробирку. Лабораторная диагностика анаэробных инфекций требует:

1) анаэробных условий культивирования.

2) хороших питательных сред с добавками, гемином.

3) селективных сред.

4) параллельного посева и на аэробную флору.

5) микроскопирования нативного материала.

Для культивирования анаэробов используют специальное оборудование:

1. Микроанаэростаты (МИ-752) – металлические банки или банки, изготовленные из прочного полиэтилена, с крышками, на которых укреплены монометр и 2 клапана: 1- для откачки воздуха, 2 – для подачи газа (N2, Н2, СО2, природного газа). Внутрь анаэростата помещают штативы для чашек. Можно внутрь микроанаэростата помещать газогенерирующие пакеты, представляющие собой пакет, внутри которого находятся соли лимонной кислоты или другие вещества, при добавлении к которым воды идет химическая реакция и выделяется газ. Для удаления следов О2 в микроанаэростат помещают палладиевый катализатор, поглощающий кислород (палладиевая стружка). Палладиевая стружка укладывается в полиэтеленовый пакет, который открывается перед помещением в микроанаэростат. После работы эффективность действия палладиевого катализатора снижается, в связи с чем возникает необходимость его регенерации, что достигается обработкой в сухожаровом шкафу при 160оС 1-1,5 часа (регенерировать палладиевую стружку можно до 60 раз). Завернутый перед прожариванием в бумагу палладий сохраняет способность поглощать О2 в течении 2 недель, а при герметизации упаковки 1-2 месяца. В микроанаэростат рекомендуется помещать индикатор анаэробиоза – бумажку, смоченную ризазурином (розовая окраска) или метиленовым синим (голубая окраска). Если после 1-2 часов пребывания в анаэростате индикаторная бумажка белеет, то кислорода в анаэростате нет. Если же при извлечении чашек бумажка остается окрашенной, это свидетельствует о наличии кислорода в чашках.

2.Система полиэтиленовых пакетов с зажимами. В пакет помещают газ-пак, катализатор, индикаторные бумажки и не более 2 чашек с культурами, герметично закрывают зажимом и помещают в термостат. При отсутствии палладия в газ-пак или микроанаэростат можно поместить смесь из 5 г пирогаллола и 10 г Na2CO3, поглощающих кислород. Вместо индикаторной бумажки можно пользоваться кусочками марли, пропитанными раствором из 4,2 мл 10% глюкозы, 0,1 мл 1н NaOH и 0,1 мл 1,5% водного раствора метиленовой сини или же смесью из 10 мл тиогликолевой среды и 3 капель 1 % водного раствора метиленовой сини. Импортные анаэростаты имеют ряд преимуществ по сравнению с отечественными. Прозрачные банки из оргстекла позволяют наблюдать рост микроорганизмов без нарушения герметичности внутренней среды. Наличие клапанов обеспечивает возможность замены вакуума газовой смесью (достигается это путем 3-кратного чередования откачки воздуха и запуска газовой смеси). При работе с таким анаэростатом перед открытием его нужно вначале выпустить газ вдали от источника огня (лучше в вытяжном шкафу).


Поделиться:

Дата добавления: 2015-07-26; просмотров: 56; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав





lektsii.com - Лекции.Ком - 2014-2024 год. (0.005 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав
Главная страница Случайная страница Контакты