Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника


Количественный анализ




Количественное определение барбитуратов, изолированных из биологического материала, проводят методом спектрофотометрии. Барбитураты обладают специфической абсорбцией в ультрафиолетовой области спектра, при pH 10 и 13 и отсутствии таковой при pH 2. Максимум поглощения – 240 нм (при pH 10), 260нм (при pH 13) (рис. 13).

Предварительно необходимо определить наличие определенного барбитурата методом ТСХ.

Приготовление стандартного раствора барбитуратов. Точную навеску барбитурата (50 мг) помещают в мерную колбу на 1000 мл и растворяют ее в 100 мл фосфатного буфера (pH 7,4) при осторожном перемешивании, затем объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой. Концентрация барбитурата составляет 50 мкг/мл.

Рис. 13. Спектры поглощения барбитуратов в зависимости от pH раствора

Построение калибровочного графика. В ряд мерных колб на 50 мл вносят соответственно 2, 5, 10, 15, 20 мл стандартного раствора барбитурата и доводят до метки боратным буфером (pH 10,0). Измеряют оптическую плотность растворов при λ = 240 нм в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. Раствором сравнения служит боратный буфер. По средним значениям из 3 определений строят калибровочный график (рис. 13). Полученные данные заносят в таблицу:


Таблица 3. Данные для построения калибровочного графика.

V (раб.ст.р-ра), мл          
С (барбитурата), мкг/мл          
D          

C, мкг/мл
Cx
Dx
D

Рис. 14. Калибровочный график.

 

Количественное определение барбитуратов, изолированных из биологического материала, проводят следующим образом. 5 мл хлороформного извлечения из кислого раствора помещают в делительную воронку и экстрагируют 3 порциями боратного буфера (15, 10 и 10 мл). Объединенные водные извлечения собирают в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки боратным буфером. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при λ = 240 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см по сравнению с боратным буфером. По калибровочному графику находят содержание данного барбитурата и рассчитывают концентрацию его в исходном биологическом материале по формуле:

m (мкг) = C (мкг/мл) · 50 мл


План занятия

1. Рассказать преподавателю ход выполнения работы.2. Взять задание у преподавателя.3. Провести изолирование барбитуратов из биологического материала.4. Сдать преподавателю теоретический допуск.5. Провести экстракцию из спиртовой вытяжки.6. Провести качественные реакции на барбитураты в экстракте, сравнить с известными веществами и показать результаты преподавателю.7. Методом ТСХ идентифицировать неизвестный барбитурат по сравнению с метчиками известных веществ.8. Провести количественное определение найденного барбитурата.9. Сделать выводы:9.1. О присутствии барбитуратов в анализируемом биологическом материале по качественным реакциям.9.2. Об обнаружении неизвестного барбитурата методом ТСХ.9.3. О количественном содержании найденного барбитурата в анализируемом биологическом материале.9.4. Обосновать выбор метода изолирования.10. Написать отчет о проделанной работе и сдать его преподавателю.

ВОПРОСЫ для контроля

1. Токсикологическое значение производных барбитуровой кислоты.2. Фармакологическое действие барбитуратов.3. Процессы метаболизма барбитуратов в организме человека, биомишени.4. Симптомы отравления барбитуратами.5. Написать структурные формулы данных соединений.6. Написать реакции синтеза барбитуровой кислоты.7. Физические и химические свойства барбитуратов.8. Таутомерия барбитуратов.9. Метод изолирования данных веществ из биологического материала.10. Очистка извлеченных барбитуратов от балластных веществ.11. Написать уравнения реакций данных веществ при качественном анализе.12. Объяснить различие спектров поглощения растворов барбитуратов при различных значениях рН.13. Спектрофотометрическое определение содержания барбитуратов. Ход выполнения.

Поделиться:

Дата добавления: 2015-09-13; просмотров: 177; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав





lektsii.com - Лекции.Ком - 2014-2024 год. (0.008 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав
Главная страница Случайная страница Контакты