Нингидриновая реакция. Принцип метода. Белки, полипептиды, как и свободные a-аминокислоты, дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином (гидрат трикетогидриндена)

Принцип метода. Белки, полипептиды, как и свободные a-аминокислоты, дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином (гидрат трикетогидриндена). Реакция характерна для a-аминогрупп аминокислот.

На I стадии реакции образуется восстановленный нингидрин за счет окислительного дезаминирования (образование NН₃) и декарбоксилирования (образование СО₂) a - аминокислот: О

О ||

R || R

| | ОН

CН-NН₂ + ОН ¾¾¾® CН + СО₂ + NН₃ + Н

| ОН ||

СООН О ||

аминокислота || О

О

Окисленный Восстановленный

нингидрин нингидрин

На II стадии образовавшийся аммиак реагирует с эквимолярными количествами окисленного и восстановленного нингидрина, образуя сине-фиолетовый продукт, интенсивность окраски которого (при 570 нм) пропорциональна количеству аминокислоты:

О О

|| ||

=N¾

Н

|| ||

О О

Ход работы.В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1 %-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1 %-ного раствора растительного альбумина. В каждую пробирку добавляют по 3 капли 0,5 %-ного раствора нингидрина и нагревают до кипения. Через 2–3 минуты в пробирках появляется розовое, красное, а затем сине-фиолетовое окрашивание.