Ксантопротеиновая реакция. Принцип метода.При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты белок выпадает в осадок

Принцип метода.При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты белок выпадает в осадок, который при нагревании растворяется и жидкость окрашивается в желтый цвет. Эта реакция характерна для ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина и триптофона), которые подвергаются нитрованию:

NО₂

|

|

НО¾ ¾СН₂¾СН¾СООН +2 НNО₃¾®НО¾ ¾СН₂¾СН¾СООН

| |

NН₂ NО₂ NН₂ +2Н₂О

Тирозин Динитротирозин

Нитропроизводное аминокислот в щелочной среде образуют соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет. Например:

NО₂

Динитротирозин + NH4OH О= СН2¾СН¾СООН + NН4+ + Н2О | NН2 N О О -

Ход работы.В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1 %-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1 %-ного раствора растительного альбумина. Затем в пробирки добавляют по 3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают (осторожно!). При нагревании раствор и выпавший белый осадок или муть от свернувшегося белка окрашиваются в ярко-желтый цвет при наличии ароматических аминокислот: в пробирке с желатином появляется едва заметное бледно-желтое окрашивание (обусловленное незначительной примесью других белков). Пробирки охлаждают, после этого в них осторожно добавляют по 10 капель 30 %-ного раствора гидроксида натрия. Выпавший в начале осадок белка растворяется, и жидкость окрашивается в ярко- оранжевый цвет.