Методы контроля ветеринарных билогических препаратов.

Государственный надзор и контроль за производством и качеством биологических препаратов для ветеринарии и животноводства, изготовляемых на предприятиях биопромышленности MСX РФ, других ведомств и министерств (в том числе поступающих из-за рубежа), осу-тся Всероссийским Государственным научно-исследовательским институтом контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). В задачу такого надзора и контроля входят: 1) государственный учет имеющееся в системе МСХ PФ, а также поступающих из-за рубежа и высылаемых в зарубежные страны культур микроорганизмов, токсинов и ядов животного и растительного происхождения; 2) хранение и поддержание национального фонда высокоценных штаммов культур микроорганизмов, используемых для производства препаратов и научно-исследовательских целей; 3) проведение экспертизы новых фармакологических препаратов и различиях веществ, предлагаемых для ветеринарных и животноводческих целей научными учреждениями России и зарубежными фирмами. В настоящее время все препараты, применяемые в животноводстсве и ветеринарии, систематически подвергаются государственному контролю, осуществляемому государственными контролерами ВГНКИ, работающими непосредственно на биопредприятиях. С этой целью на каждом биопредприятии создаются контрольные лаборатории во главве с государственным контролером (заведующим отделом биологического контроля при биопредприятии). Государственные контролеры на биопредприятиях являются штатными сотрудниками ВГНКИ. Они обязаны осуществлять контроль за технологией изготовления препаратов и за качеством готовой продукции в соответствии с требованиями нормативно-технической документации (НТД). Государственные контролеры имеют право полностью или частично приостанавливать производство и выпуск биопрепаратов в тех случаях, когда нпрусаотся требования нормативно-технической документации и не принимается меры для устранения причин изготосления недоброкачественно продукции. На кажды йпрепарат, выпускаемый биопредприятием, должна иметься НТД, в кот. входят: 1) инструкция по изгготовлению и контролю препарата, утв. разработчиком данного препарата, содержащая: общие сведения о препарате и его назначении; характеристику производственных штаммов микроорганизмов и порядок работы с ними при изготовлении препарата; подробное изложение технологического процесса производства препарата; методы контроля готового изделия;, условия хранения препарата; правила по соблюдению санитарного режима и мер безопасности при изготовлении и контроле препарата;2) технические условия, утверждаемые Департаментом ветеринарии МСХ РФ и регистрируемые в Государственном комитете стандартов, включающие: технические требования к препарату; правила приемки его Госконтролером предприятия-изготовителя {методы испнтаний препарата на его соответствие требованиям НГД с указанием ГОСТов и ТУ на используемые при этом оборудование, материалы, реактивы, а также порядок транспортировки и хранения; перечень гарантий, которые должны обеспечиваться предприятием-изготовителем; 3) наставление по применению препарата, утверждаемое Департаментом ветеринарии МСХ РФ, в котором содержатся: общие сведения о препарате (внешний вид, назначение, срок годности, правила хранения); сведения о его фармакологических свойствах, подробное изложение порядка его применения. Осуществляя свои контрольные функции, государственнне контролеры обязаны руководствоваться требованиями НТД. Выпуск препаратов с биопредприятий .в ветеринарную практику допускается лишь при условии прохождения ими следующих контролей: контроль безвредности, микробиологический контроль, контроль специфической активности.

Контроль безвредности биопрепаратов проводят на ларбораторнта или сельснохозяйственнмх животных. Для живых инактивированных вакцин, лечебно-профилактических сывороток и иммуноглобу.пинов этот показатель определяют на основании данных о выживании или гибели прививаемых животных, клинических признаков их переболенания, изменений массы животных и бактериологических показателен с идентификацией выделяемой от них микрофлоры. При решении вопроса о безвредности препарата следует учитывать, что поствакцинальные осложнения могут быть обусловлены рядом причин: прямым к опосредованным токсическим эффектом, который устанавливают методами фармакологичесшгх исследований, определяя степень изменения физиологического состояния животных; недостаточной аттенуацией культуры вакпионного штамма или неполной инактивацией производственных культур, которые определятют в опытах на животных, чувствительных к данной инфекции; специфической и неспецифической сенсибилизацией, в том числе гиперчувствительностью замедленного типа. Для определения безвредности вакцины или сыворотки вводят животным парентерально. Дозы препарата, применяемые при проверке на с/х животных, должны превышать рекомендуемые для практического использования в 2-10 раз; а при проверке на лабораторных животных - приближаться к максимально переносимым. Срок наблю­дения за животными, в течение которого они должны остаться здоровыми, не менее 10 дней. Кроме того, контроль безвредности лечебно-профилактических сывороток включает проверку их апирогенности. Апирогенность проверяют на 3-х кроликах породы шиншилла массой 1,5-2,0 кг. Перед опытом кроликов в течение 3-х дней взвешивают и измеряют температуру их тела, которая должна быть в пределах 38,6-39,8 °С. Кроликов, имеющих тенденцию к снижению массы тела и повышению температуры тела, в опыт не берут. Испытуемый препарат перед введением подогревают до 37 °С и вводят кроликам в ушную вену в количестве I мл/кг массы. Через I, 2 и 3 ч после введения препарата у кроликов измеряют температуру тела. Она не должна повышаться более, чем на 0,8 °С. Контроль безвредности антибиотиков обусловлен тем, что при антибиотикотерапии возможны осложнения, в виде прямых токсических реакций и непрямых побочных реакций. Прямых побочные реакции - обусловлены органотропностыо и специфичностью эффекта, зависят от дозы, метода и длительности применения антибиотиков. Могут проявляться поражением почек, печени, нервной и кроветворной систем, нарушением деятельности велудочно-кишечного тракта.

Непрямые побочные реакции неспецифичны для антибиотиков и могут быть вызвали веществами различной природы. К такого рода осложнениям относятся; гиперчувствительность, реакция бактериолиза (освобождение большого количества эндотоксинов при гибели и разрушении микроорганизмов), дисбактериоз (качественные и количественные изменения нормальной микрофлоры желудочно-кишечного траста) и др. Исходя из вышеизложенного, антибиотики контролируют в отношении острой и хронической токсичности. Для контроля острой токсичности определяют: максимально переносимую дояу (МПД) препарата, дозу, рнзнвающую гибель 50% подопытних животных (LД5о), дозу, вызывающую гибель 100% подопытных животных (LD 100). Для контроля хронической токсичности изучают влияние препарата на различные органы и системы организма подопытных животных при его длительном применении. Микробиологический контроль. В жиоых бактерийных и вирусуых вакцинах не должно содержаться посторонней микрофлоры (контаминан-тов); инактивированные вакцины, анатоксины, лечебно-профилактические сыворотки и иммуноглобулины должны быть стерильными (свободными от жизнеспособной микрофлоры). Чистоту живых и стерильность инактивированных вакцин, сывороточных препаратов и анатоксинов проверяют высевами на специальные питательные среды. Для отого.применяют МПА, МПБ с глюкозой; бульон и агар Мартена; МППБ под маслом; бульон и агар Сабуро или Чапека и другие среды, обеспечивающие рост как анаэробных, так и аэробных бактерий и грибов. Посевы выдерживают при температуре 36-37 °С. Из флаконов с посевами инактивированных вакцин» анатоксинов, сывороточных препаратов там, где нет роста, через 5-6 дней делают пересевы на аналогичные среды. Первичные посевы выдерживают при указанной температуре 15 дней. Среды Сибуро или Чапека для выявления грибковой микрофло­ры выдерживают 15 дней -при комнатной температуре (20-25 °С). Пересевы выдерживают не менее 10-ти дней. Для выяснения стерильности антибиотиков используют, как правило, два метода. Первый метод связан с инактиваиией антибиотика биологическим инактиватором (например инактивация бензилпенициллина и полусинтетических препаратов, полученных на его основе, ферментом пенициллиназой) и последующим высовом на питательные среды. При втором методе раствор антибиотиков пропускают через мембранные фильтры с диаметром пор не более 0,75 мкм. После атого фильтры переносят на плотные или жидкие питательные среды. Вторым методом пользуются в тех случаях, когда для антибиотика не имеется биологическж инактиваторов его активности.

Контроль специфической активности. Нммуногенную специфическую активность вакцин и анатоксинов оценивают в опытах прямого заражения иммунизированных животных пли косвенными методами. Контроль иммуногенности в. опытах пряного заражении возможен в двух различных вариантах. При порвом иммуногенность оценивают после однократного (или двукратного) введения препарата не менее чем 10-ти подопытным животным. В контроле должно быть также 10 животных, равноценных подопытным по степени чувствительности к заболеванию. Всех животных через определенный срок после вакцинации (14-21 день) заражают соответствующей культурой контрольного вирулентного штамма в количестве 5-10 (а в ряде случаев 100-200) ЛД50 или ИД50. Вакцину считают иммуногенной при выживании без признаков заболевания не менее 8 вакцинированных и гибели или заболевании не менее 8 контрольных животных. Допускается заболевание 3 вакцинированных животных при 100%-ной гибели (заболевании) контрольных. Второй вариант контроля иммуногенности вакцин и анатоксинов заключается в определении ЛД50 или ИД50 контрольного вирулентного штамма для вакцинировали и кнтактных (контрольных) животных. Многократное (в 5-10 и более раз) увеличение величины ЛД50(ИД50) для привитых животных по сравнению с контрольными свидетельствует об иммуногенности препарата. Косвенными показателями иммунологической специфической активности биопрепаратов могут быть алнтигенность, характеризующая уровень образования специфических антител в крови вакцинированных животных, и концентрация антигенов в прививочной дозе. Специфическую активность сывороточных лечебно-профилактических и диагностических препаратов определяют путем измерения эффекта, присущего препарату данного вида. Так, лечебно-профилактические сыворотки проверяют на превентивные свойства на восприимчивых крупных и лабораторных животных. Для этого сыворотку вводят животным внутрибрюшинно, подкожно или внутримышечно. Через 24 ч после инъекции сыворотки животкых заражают подтитрованной дозой контрольного вирулентного штамма соответствующего микроорганизма. Подопытные животные должны оставаться здоровыми минимум 14 дней при гибели или переболевании контрольных. Кроме того, контроль специфической активности лечебно-профилак­тических сывороток мокет быть основан на определении концентрации специфических антител в опытах нейтрализации этими сыворотками соответствующих инфекционных агентов кли их токсинов. Чем меньше доза сыворотки, способная нейтрализовать действие определенной дозы инфекционного агента или токсина, тем выше ее активность. Диагностические сывороточные препарата проверяют в соответстующих реакциях (РА, РН, РДП, РТГЛ, РНГЛ, РСК и др.). Активность сывороточных препаратов любого типа определяют по сравненшэ со стандартными (эталонными) референс-препаратами. Для этого испытуемую сыворотку проверяют параллельно со стандартной, а затем рассчитывают дозу испытуемой сыворотки, эквивалентную по эффекту единице активности стандарта. На каждую проверенную серию биопрепарата заполняют паспорт, п котором укалывают основные технологические, лечебно-проклэктичоские и другие специфические показатели: номер серии; дату изготовления; объем серии (в литрах, дозах); объем препарата в расфасовочных емкостях; результаты, полученные при проховденни препаратом контролей; метод и сроки хранения. На каждой серии биопрепарата, признанной пригодной для использования в животноводстве и ветеринарии, на предприятии-изготовителе оставляют арбитражные образцы, которце должны сохраняться в условиях, определенных требованиями НТД, в течение всего срока годности данной серии препарата.