Получение продуцентов путем ступенчатого отбора случайных мутаций и отбор мутантов с заданным фенотипом

1. Отбор при подавлении количественного признака. Существуют в-ва, ингибирующие ферменты, воздействующие на необходимое соединение – признак не проявляется. Пример: мутанты, не зависимые от катобалитной репрессии.

2. Отбор мутантов с определенным фенотипом. Морфологические изменения в клетке. Полученных ауксотрофных мутантов применяют часто для продуцентов аминокислот.

Выделив более продуктивный вариант, процедуру мутагенеза и отбора повторяют. Т.е. проводят ступенчатый отбор. Обычно ступенчатый отбор вкл-т эт. мутагенеза, а также выделение спонтанных мутантов. Схема получения продуцентов таким методом имеет вид дерева.

40.Мутации изменяющие экспрессию генов на примере лактозного и триптофанового оперонов LAC-оперон:

Ген I-даёт белок репрессор, который имеет сродство к промоторной области,т.е. он закрывает ту область ДНК ,мешая движению РНК-полимеразы.

1-область узнавания активатора;2-область узнавания полимеразы;3-оператор;

1,2,3-промотор;4- терминатор(место связывания фактора В

К промотору должна прикрепиться ДНК-зависимая РНК-полимераза.

Lac Z-β-галаксидаза(разрушает дисахарид лактозу до глюкозы и галактозы)

Lac Y-β-галоктозидпермиаза

Lac A-не участвует в утилизации лактозы.

Если лактоза есть в среде:происходит открытие оператора и начинается транскрипция РНК-полимеразы,т.е. утилизация лактозы. При обрботке молока гактозидазой-это молоко можно использовать для питания маленьких детей и людей,которые не могут утилизировать лактозу.

Если убрать терминатор – усилится синтез белка,если убрать оператор-усилится синтез белка.

При наличии в среде и лактозы и глюкозы будет происходить утилизация глюкозы сначала.В промоторной области есть ещё одна часть которая активируется(область узнавания активатора)

Мутации в последовательностях гена-регулятора или оператора приводят в определённых случаях к нарушению либо образования полноценного репрессора,либо нарушение его сродства к оператору.

Триптофановый оперон:с помощью аналога триптофана можно получить устойчивые к ингибирующему действию триптофана мутанты,характеризующиеся повышенной продукцией данной аминокислоты. Генетический анализ показывал,что у таких мутантов повреждён ген-регулятор распологающийся на значительном расстоянии от контролируемых им генов триптофанового оперона.