Хроматографические характеристики, используемые для количественного определения веществ

В качестве аналитического сигнала в хроматографии используют высоту или площадь хроматографического пика, которые пропорциональны содержанию вещества в хроматографической зоне.

Приёмы количественного определения, используемые в хроматографических методах, приведены в табл. 22.3.

Табл. 22.3.

Приёмы количественного определения в хроматографии

Метод	Принцип метода
нормировки	Используется для определения относительного содержания компонентов в анализируемой смеси. Может быть применён лишь в том случае, когда на хроматограмме присутствуют пики всех компонентов смеси. или , где f – поправочные коэффициенты, учитывающие неодинаковую чувствительность детектора к различным компонентам смеси
внешнего стандарта	Аналитическим сигналом является высота (площадь) пика определяемого вещества
внутреннего стандарта	Аналитическим сигналом является отношение высот (площадей) пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта.

Внутренний стандарт представляет собой специально добавляемое к анализируемой пробе в точно измеренном количестве вещество, свойства которого близки к свойствам определяемого вещества. Вещество, взятое в качестве внутреннего стандарта:

· не должно химически взаимодействовать с компонентами анализируемой смеси, с неподвижной или подвижной фазой;

· должно отсутствовать в исходной анализируемой смеси;

· давать пик, находящийся на хроматограмме в непосредственной близости от пиков определяемых веществ, но не накладывающийся на них и на пики других соединений.

Концентрацию внутреннего стандарта выбирают таким образом, чтобы высота (площадь) пика внутреннего стандарта была соизмерима с высотой (площадью) пика определяемого вещества (рис. 22.3).

Рис. 22.3. Хроматограмма, полученная при ГЖХ-определении аминазина в печени (внутренний стандарт – бромгексин)

В методе внешнего и внутреннего стандарта используются одни и те же приёмы расчёта содержания вещества (метод градуировочного графика и др.). Основное различие заключается в характере используемого аналитического сигнала. Метод внутреннего стандарта обладает большей надёжностью и даёт более воспроизводимые результаты, особенно в случае сложной пробоподготовки.