Процессинг мРНК эукариот

Энхансеры.

Усиливающие транскрипцию при взаимодействии со специфическими белками. Энхансеры это не непрерывная – прерывающиеся последовательности ДНК. Они организованы в модули (М1, М2, М3, М4). Одинаковые модули могут встречаться в разных энхансерах, но для каждого энхансера набор модулей уникален. Модуль это короткая последовательность, состоящая не более чем из 2х витков спирали – примерно 20 нуклеотидных пар. Модули ориентированы перед, за и даже внутри гена. Таким образом М1, М2, М3 и М4 это один энхансер состоящий из 4х модулей. Каждый из них узнаётся своими белками, а они в свою очередь взаимодействуют друг с другом. Если в клетке присутствуют все соответствующие белки, то участку ДНК придаётся определённая конформация и начинается синтез мРНК.

Актуализация. Все соматические клетки многоклеточного эукариотического организма имеют одинаковый набор генов. Все гены в них работают на фоновом уровне и не имеют фенотипического проявления, а экспрессируются лишь те, у которых все энхансерные модули узнаны своими белками и эти белки взаимодействуют друг с другом.

Сайленсоры. Это последовательности ослабляющие транскрипцию при взаимодействии с белками. При соответствующем наборе белков экспрессия отдельных генов может быть подавлена.

Некоторые реперссированые (не экспрессирующиеся) гены активируются каскадом событий, запускаемым повышением температуры или синтезом гормона. Гормон, поступив в кровоток, связывается с рецепторами, проникает в клетку, взаимодействует с клеточными белками, изменяет их конформацию, такой белок проникает в ядро, связывается с регуляторным элементом, происходит инициация транскрипции соответствующих генов. Есть белки, которые взаимодействуя с регуляторными элементами блокируют транскрипцию. Например: белок NRSF блокирует транскрипцию соответствующих генов, в нейронах этот белок не синтезируется и как следствие идёт активная транскрипция.

Процессинг РНК у эукариот.

Посттарнскрипционному Ему подвергаются все РНК. Процессинг рРНК и тРНК принципиально не отличается от прокариот.

Процессинг мРНК эукариот

Этапы:

1. Кэпирование. Все 100% синтезированных мРНК. Кэп – метилированый гуанозинтрифосфат присоединенный в необычной позиции (5’ к 5‘)и две метилированые рибозы.

Функции: узнавание кэп-связывающих белков, защита от действии экзонуклеаз

По мере образования про-мРНК ( до 30 нуклеотидов) к 5» концу несущему обязательно пурин (аденин, гуанозин) присоединяется гуанин, который затем метилируется. Участие – гуанинтрансферазы.

2. Полиаденилирование. Только 95% всех мРНК и именно эти 95% вступают в этап сплайсинга. Другие 5% не подвергаются сплайсингу и эта матричная РНК в которой зашифрованы альфа и бета интерфероны и белки гистоны.

После завершения синтеза мРНА, полиаденидированию предшествует разрезание специфической эндо кулеазо). Ближе 3» концу про-мРНК, а именно через 20 нуклеотидов после специфической последовательности (ААУАА) синтез безматричный. у каждого вида мРНК полиАхвост определённой длины, покрыт полиАсвязывающими белками. Врея жизни мРНК коррелирует с длиной полиАхвоста.

3. Сплайсингу подвергаются 95% мРНК. Ф. Шарп, 1978 год. Копии вырезанных интронов гидролизуются до нуклеотидов. Осуществляется матюразами. Иногда в сплайсинге участвует sРНК. Правила: 1. фланкированы GT-AG, 2. Нуерация остаётся, но может быть вместе с интронами вырезан экзон.

24.10.12

Цис-сплайсинг (внутримолекулярный сплайсинг) осуществляется в ядре. На первом этапе происходит сборка комплекса сплайсинга. Далее происходит расщепление в 5»сайте сплайсинга, в ходе реакции накапливается два продукта – правильно лигированые экзоны и свободный целый интрон в виде структуры типа «лассо». Множество ядерных факторов белков и рибонуклеопротеидных комплексов - Малые ядерные рибонуклеопротеиды. Этот комплекс, который катализирует сплайсинг, называют сплайсингосомой. Она состоит из интрона, связанного минимум с 5ю мя рнп и некоторыми вспомогательными белками. Сплайсингосомы образуются путём спаривания молекул РНК, присоединением белков к РНК и связыванием этих белков друг с другом. Конечным продуктом такого сплайсинга является вырезание интрона и сшивание фланкирующих его экзонов.

Транс-сплайсингэто пример межмолекулярного сплайсинга. Показан для всех мРНК у трипаносомы и продемонстрирована в опятах ин витро. В ходе него происходит лигирование двух экзонов находящихся в разных молекулах РНК с одновременным удалением фланкирующих их интронов.

Альтернативный сплайсинг обнаружен от дрозофилы до человека и вирусов и показан он для генов, кодирующих белки, участвующие в формировнаии цитоскелета, мышечных сокращений, сборке мемебранных рецепторов, пептидных гормонов, в промежуточном метаболизме и транспозиции ДНК. В сплайсингосоме этот процесс тоже идёт, связан с ферментами занимающимися полиаденилированием. Таким образом мРНК на всём пути следования до завершения трансляции, защищена от нуклеаз с помощью связанных с ней белков (информоферы). Комплекс мРНК с информоферами с ифнормосомы, плюс сРНК. В составе информосом мРНК живёт от нескольких минут до нескольких дней.

4. Редактирование

Сплайсинг тРНК.

Интроны в генах тРНК локализованы через один нуклеотид после антикодона ближе к 3»концу тРНК. От 14 до 60 нуклеотидов. Механизм сплайсинга тРНК лучше всего изучен у дрожжей, а так же в опытах с другими низшими эукариотами и растениями. Задача вырезания интрона в антикодоновой петле реализуется за счёт участия:

Эндонуклеаз (узнать интрон и расщепить про-тРНК в обоих сайтах сплайсинга с образованием свободных 3» и 5»концов экзонов)

Полифункциональный белок (катализирующий все реакции кроме последней – фосфатазной)

2»фосфатаза (удаляет монофосфат с 2»конца 5»концевого экзона)

Лигаза (сшивает)

АТФ

Сплайсинг рРНК.

Гены ядерных рРНК низших эукариот содержат особые интроны, которые претерпевают уникальный механизм сплайсинга. Это интроны группы I, их нет в генах позвоночных. Общие свойства: сами катализируют свой сплайсинг (автосплайсинг), информация для сплайсинга содержится в коротких внутренних последовательностях внутри интрона(эти последовательности обеспечивают укладку молекулы с образованием характерной пространственной структуры), этот сплайсинг инициируется свободным гуанозином (экзогенным) или любым из его 5»фосфорилированых производных, конечными продуктами являются зрелая рРНК линейная РНК и кор-интроны (кольцевые)

Автоспласинг 1982 г., на инфузория, Томас Чек

Этот процесс чувствителен к ионам магния. Этот сплайсинг показывает что каталитической активностью облажают не только белки но и про-рРНК. Самосплайсинг интронов 1 группы осуществляется последовательно реакций транс-этерификации, где процессы фосфодиэфирного обмена не сопровождаются гидролизом.

Сплайсинг интронов группы 2 мало распространены, обнаружены в 2х митохондриальных генах дрожжей: ген одной из субъединиц цитохромоксидазы и ген цитохрома Б. так же подвергаются самосплайсингу, но инициация сплайсинга и дёт при участии эндогенного гуанозина, то есть гуанозина находящегося в самом интроне. Высвобожденные интроны – подобны лассо, где 5»концевой фосфат РНК интрона соединён фосфодиэфирной связью с 2»гидроксильной группы внутреннего нуклеотида.

Регуляция экспрессии генов у эукариот