![]() КАТЕГОРИИ:
АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Задание к лабораторной работе. 8.2.1 Приготовить микропрепараты из подготовленных различными способами проб молока.8.2.1 Приготовить микропрепараты из подготовленных различными способами проб молока. Методика выполнения работы. Молоко необходимо разлить в колбы объёмом 100 мл приблизительно по 40-50 мл, закрыть их ватными пробками. Параллельно осуществляют второй вариант опыта. Разлив молоко в колбы, закрывают их ватными пробками, доводят молоко до кипения. Колбы с кипяченым и некипячёным молоком ставят в термостат при температуре 30 0С. Через 10-12 ч свежее (некипяченое) молоко скисает. В колбе образуется плотный, ровный сгусток без следов газа. Сгусток образуется вследствие того, что молочная кислота реагирует с казеинатом кальция и кальций выпадает в осадок. В кипячёном молоке молочно-кислые бактерии, поскольку они не образуют спор, погибают, споры же масляно-кислых бактерий сохраняются. При инкубации в термостате они прорастают, осуществляя масляно-кислое брожение лактозы. В результате реакции масляной кислоты с казеинатом кальция в этом варианте в осадок выпадает казеиновая кислота. В дальнейшем она подвергается пептонизации; осадок переходит в кремовую жидкость с неприятным запахом масляной кислоты (запах пота) и прогорклым вкусом. 1 Из прокисшего молока готовят микропрепарат. Бактериологической петлёй извлекают сгусток, размазывают его на предметном стекле очень тонким слоем без воды. 2 Сушат на воздухе 3 Фиксируют смесью спирта с эфиром (примерно 1:1), несколько раз нанося смесь на мазок и сливая её. При такой фиксации бактерии не только погибают и прикрепляются к стеклу, но и, параллельно, эфиром извлекается и удаляется жир. Это необходимо, поскольку капли жира на препарате мешают окраске и микроскопированию. 4 Фиксированный препарат окрашивают метиленовым синим в течение 2-3 мин 5 Промывают водой 6 Высушивают и микроскопируют с иммерсией. Метиленовый синий – лучший краситель для молочно-кислых бактерий, так как он слабо окрашивает основной фон (казеин) и хорошо окрашивает клетки бактерий. Получаются наиболее четкие препараты. 8.2.2 Полученные результаты зарисовать, сделать выводы. В микропрепарате чаще преобладают мелкие округлые клетки Streptococcus lactis, соединенные в короткие цепочки. Этот микроорганизм является возбудителем естественным скисанием молока в наших широтах. Оптимальная температура его развития – 30 0С. Он накапливает до 1 % молочной кислоты. Нередко в препарате наблюдаются тонкие палочки рода Lactobacterium, варьирующие в размере, иногда содержащие зерна волютина. Чаще встречается Lactobacterium bugaricum – возбудитель естественного скисания молока в южных широтах. Оптимальная температура его развития – 40 0С. Кислотоустойчив, он накапливает до 3,5 % молочной кислоты. Если на поверхности скисшего молока появляется плёнка, то в мазке обнаруживается так же и молочная плесень, четырехугольные или овальные клетки которой отличаются от молочно-кислых своими размерами. 8.2.3 Скисшие образцы проверить на наличие молочной кислоты. Наличие молочной кислоты в скисших образцах можно подтвердить качественными реакциями. Методика выполнения работы. В коническую колбу объёмом 100 мл берут 5 мл фильтрата, добавляют 2 мл крепкой серной кислоты, и нагревают при взбалтывании до начала кипения. Затем, продолжая кипячение и помешивание, пипеткой по каплям приливают 5 мл 5 % р-ра КМnО4, который обесцвечивается. В этих условиях молочная кислота переходит в уксусный альдегид. Для распознавания уксусного альдегида быстро покрывают горлышко колбы фильтровальной бумагой, смоченной аммиачным раствором АgNО3. Аккуратно, чтобы не разорвать фильтровальную бумагу, прижимают её к краям горла колбы, продолжая нагревание. Уксусный альдегид улетучивается и, реагируя с аммиачным раствором АgNО3, вызывает почернение бумаги с серебристой побежалостью. Так выделяется металлическое серебро. 8.2.4 Учесть результаты реакции и занести в таблицу (таблица 3).
Таблица 3 - Протокол исследования
Вопросы к защите лабораторной работы 1 На какие виды в зависимости от соотношения получаемых конечных продуктов подразделяется молочно-кислое брожение? 2 Что является продуктом брожения гомоферментативных молочно-кислых бактерий 3 Какой продукт образуется в результате брожения гетероферментативных молочно-кислых бактерий? 4 Охарактеризуйте молочно-кислые бактерии. 5 Какими по морфологии могут быть молочно-кислые бактерии? 6 Какой антибиотик вырабатывается некоторыми молочно-кислыми бактериями?
|