Гидролиз нуклепротеидов дрожжей

Для изучения химического состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей и обнаруживают продукты гидролиза- полипептиды, азотистые основания, углеводы и фосфорную кислоту.

Ход работы:

1) Гидролиз нуклеопротеидов. Отвешивают 1 г прессованных дрожжей или 0,2 г сухих дрожжей и переносят в круглодонную колбу, вливают 15-20 мл 10%-ного раствора серной кислоты, закрывают колбу пробкой с воздушным холодильником и ставят в водяную баню на 1 час с момента закипания жидкости. Затем колбу охлаждают, содержимое фильтруют и проделывают следующие реакции.

2) Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10%-ного раствора NaOH и 1 каплю 1%-ного раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в сине-фиолетовый цвет вследствие образования биуретового комплекса между пептидной группировкой и ионами меди.

3) Открытие пуриновых оснований. К 1 мл фильтрата добавляют по каплям концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции на лакмус и приливают 0,5 мл аммиачного раствора окиси серебра. Выпадают в осадок серебряные соли пуриновых оснований.

4) Качественные реакции на рибозу и дезоксирибозу.

Окрытие рибозы и дезоксирибозы основано на их способности восстанавливать соли металлов (меди, висмут, серебро) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или в случае закиси - до свободного состояния; пентозы при этом окисляются с образованием соответствующих кислот.

Реакция Троммера заключается в восстановлении окисной меди в закисную под влиянием рибозы и дезоксирибозы, образующихся в результате гидролиза нуклеопротеидов дрожжей. Реакции протекают по уравнениям:

CuSO₄ + 2NaOH®Cu(OH)₂ + Na₂SO₄

К 5 каплям гидролизата добавляют 5 капель 30%-ного раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO₄ до появления осадка гидроокиси меди Cu(OH)₂. Жидкость перемешивают и кипятят. Выпадает осадок желтого цвета (CuOH) или красного (Cu₂O).

Пентозы можно определить и по реакции с тимолом и концентрированной серной кислотой. Последняя вызывает дегидратацию пентоз и образование фурфурола, который с тимолом дает соединение красного цвета:

К 5 каплям фильтрата добавляют 1 каплю 1%-ного спиртового раствора тимола и осторожно наслаивают 5 капель концентрированной кислоты. Жидкость окрашивается в красный цвет.

5) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

К 10 каплям молибденового реактива (молибденовокислый аммоний в азотной кислоте) добавляют 5 капель гидролизата дрожжей и кипятят на пламени спиртовки. Жидкость окрашивается в лимонно - желтый цвет. После охлаждения пробирки выпадает желтый осадок комплексного соединения фосфорномолибденовокислого аммония:

12(NH₄)₂ MoO₄ + H₃ PO₄ + 2I HNO₃ =2INH₄ NO₃ + (NH₄)₃ PO₄ ·12 MoO₃ + 12H₂O

Материалы и реактивы: дрожжи хлебопекарные, пресованные или сушеные; 10%-ный раствор серной кислоты; 10%-ный раствор едкого натра; 1%-ный раствор сернокислой меди; концентрированный раствор аммиака; 30%-ный раствор едкого натра; 7%-ный раствор сернокислой меди; 1%-ный спиртовой раствор тимола; концентрированная азотная кислота; молибденовый реактив (см. приложение Б, п.15)

Оборудование:. пробирки обыкновенные; колбы с воздушным холодильником; водяная баня; спиртовка; пипетки; лакмус.