Лабораторная диагностика

На ранних стадиях заболевания исключительно важную диагностическую ценность имеет микроскопия нативного материала и экссудата. При бактериоскопии мазков раневого отделяемого на наличие в нем анаэробов следует одновременно оценивать, как минимум, два признака – морфологию и окраску по Грамму. Учитывая всеобщую доступность и высокую информативность методики, приводим краткую морфо-функциональную характеристику основных возбудителей АНИ.

Род БАКТЕРОИДЫ включает 22 вида бактерий палочковидной формы, которые располагаются в виде отдельных клеток, реже парами или в виде цепочек. Название «бактероиды» связано с необычной формой представителей этого рода: микробная клетка имеет форму короткой палочки с уширенной серединой, что отдаленно напоминает бочонок. Это грамотрицательные бактерии, не образующие спор, но образующие капсулу. Они могут быть подвижными, благодаря наличию жгутиков, или неподвижными. Бактероиды не продуцируют каталазу.

Род ФУЗОБАКТЕРИИ включает 16 видов бактерий палочковидной веретенообразной формы. Это грамотрицательные, неспорообразующие, подвижные бактерии, не продуцирующие каталазу.

Род ПЕПТОКОККИ включают 6 видов бактерий округлой, сферической формы, грамположительные, неподвижны, располагаются в виде отдельных клеток, а также парами, тетрадами или в виде скоплений, не имеющих формы. Они тоже не продуцируют каталазу.

Род ПЕПТОСТРЕПТОКОККИ включают 5 видов бактерий сферической формы, грамположительной окраски, неподвижные, располагаются в виде цепочек, не продуцируют каталазу.

Род ВЕЙЛОНЕЛЛЫ включает 7 видов бактерий сферической формы, грамотрицательной окраски, неподвижные, не образуют оксидазу и каталазу.

Бактериоскопическая индикация перечисленных микроорганизмов в нативном мазке может быть выполнена четырьмя методами: а) простой метод; б) метод окраски по Граму; в) его модификация с докраской сафранином для определения бактероидов, фузобактерий и вейлонелл; г) определение каталазоотрицательных бактерий, каковыми являются все клостридиальные и неклостридиальные анаэробы.

Бактериологическое исследование при анаэробных возбудителях представляется исключительно ценным, поскольку позволяет идентифицировать возбудителя и определить его чувствительность к антибактериальным препаратам. Оно имеет ряд особенностей. Забор материала и транспортировка его в баклабораторию должны гарантировать отсутствие контакта его с кислородом воздуха, поскольку большинство анаэробов при этом гибнут. Сбор жидких материалов лучше произвести с помощью одноразового шприца. Для герметизации шприца с материалом иглу необходимо вколоть в резиновую пробку. Кусочки тканей иссекаются обычным способом и помещаются в бескислородные контейнеры (пробирки), либо помещаются в питательные среды у постели больного.

Для получения достоверного результата посевов патологического материала производится на специальные питательные среды (Китт–Тароцци, Вильсон–Блера и др.). Посевы инкубируют в микроанаэростатах с использованием трехкомпонентной газовой смеси (водород 10%, углекислый газ 10%, азот 80%) в течение 48-72 часов при температуре 37 °С. Параллельно культивирование производится в анаэробных условиях. Идентификацию аэробов осуществляют на основании комплекса свойств: морфологических, культуральных, биохимических, биологических, тестов антибиотико-чувствительности и толерантности.

Газожидкостная хроматография (ГЖХ) позволяет идентифицировать жидкие или летучие вещества по принципу поглощения ими определенных спектров световых волн. Установлено, что анаэробные микроорганизмы в процессе метаболизма продуцируют в среду роста или в пораженные ткани летучие жирные кислоты – пропионовую, масляную, изомасляную, валериановую, изовалериановую и др. Патогномоничными маркерами клостридиальных возбудителей в настоящее время признаны 10-оксистеориновая и 10-оксиоктадеценовая кислоты. В то же время аэробные микроорганизмы подобных соединений не образуют. Эти метаболиты анаэробов, извлеченные из среды или из ткани с помощью эфира, вводятся в хроматограф и идентифицируются по специальной технологии.

Наиболее современным и перспективным для диагностики анаэробных поражений представляется экспресс-метод лазерной флюоресценции. Он позволяет за 30-60 минут не только идентифицировать возбудителей инфекции, но и определить их концентрацию в ткани. Ценность метода повышает его возможность быстро определить чувствительность микрофлоры к антибиотикам и антисептическим препаратам по их взаимодействию in vitro

Своевременному распознаванию анаэробных воспалительных процессов, несомненно, способствуют УЗИ, компьютерная и магнито-резонансная томография.