Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника



ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Читайте также:
  1. I. Государственный стандарт общего образования и его назначение
  2. II 5.3. Определение сухой плотности
  3. II этап. Определение общей потребности в собственных финансовых ресурсах.
  4. III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДСТВА
  5. IV. Определение компенсирующего объёма реализации при изменении анализируемого фактора
  6. Nbsp;   7 Определение реакций опор для группы Ассура
  7. V 1: Определение и классификация
  8. А как дети причастны плоти и крови, то и Он также воспринял оные, дабы смертью лишить силы имеющего державу смерти, то есть диавола.
  9. А. Определение размеров района аварии
  10. А. Определение удельного электрического сопротивления максимально влажных пород мостовым способом переменного тока.

1) Высокая степень эксплицитности. В процессе коммуникации нельзя надеяться на подразумеваемую, но не высказанную вслух информацию из-за различий в фоновых знаниях;

2) Избыточность. Количественные показатели информации (что такое «мало», «много», «достаточно информации») различны для носителя языка и для иностранца. Поэтому эффективное межкультурное общение требует избыточности, которая выражается в объяснении потенциально непонятных лексических единиц, использовании полносоставных конструкций вместо эллиптических, повторов, комментариев, а также в активном применении невербальных средств;

3) Обязательно следует использовать не только голос, но и мимику, жесты, опираться на запахи, вкусовые ощущения и т.п. Этим объясняется тот факт, почему люди разговаривают с иностранцами громче, чем с соотечественниками, особенно в моменты непонимания;

4) На ее основе адресант может сделать выводы о правильности интерпретации информации со стороны собеседника и корректировать ход общения. Для этого необходимы внимательное отношение к вербальным и невербальным реакциям собеседника, задавание уточняющих вопросов («Что Вы имеете в виду?»), перефразирование («Другими словами…», «По Вашему мнению…», «Как я понимаю, Вы говорите о…»).

7. В чём состоят основные положения теории МКК?

 

8. Какие типы коммуникативных неудач выделяет Д.Б. Гудков?

Среди вербальных коммуникативных неудач Д.Б. Гудков называет следующие группы:

1. Технические ошибки – связаны с неверным фонетическим или графическим оформлением речи на иностранном языке.

2. Системные ошибки – вызваны слабым владением системой языковых значений разного уровня. Они классифицируются в соответствии с уровнями языковой системы. Выделяют:

а. Интонационные ошибки, вызванные недостаточным пониманием смыслоразличительных возможностей инокультурной интонационной системы. В качестве иллюстрации этого положения можно привести ситуацию, когда иностранец в студенческой столовой попросил раздатчицу положить ему рис. Женщина ответила, что риса нет. Молодой человек не расслышал и переспросил: «Рис есть?», но оформил свою фразу не с интонацией вопроса без вопросительного слова, а со свойственной его языку интонацией категорического утверждения, что глубоко обидело работницу столовой, начавшую кричать, что она ничего не прячет и не заслужила обвинений в нечестности.



б. Лексические ошибки – обусловлены слабым владением системой лексических значений иностранного языка. Например, иностранные студенты часто не понимают разницу в значении двух слов – «слышать» и «слушать», что может привести к недоразумениям. Представьте себе, как Вы отреагируете на фразу: «Ты говоришь очень тихо, я тебя не слушаю».

в. Грамматические ошибки – связаны со слабым владением системой грамматических значений иностранного языка. Для понимания сути соответствующих коммуникативных неудач сравните реакцию слушающего на два предложения, которые в одной и той же ситуации мог бы сформулировать человек, не владеющий категорией вида в русском языке: «К тебе два часа назад пришел Андрей» и «К тебе два часа назад приходил Андрей».

г. Словообразовательные ошибки – здесь зоной особых сложностей является приставочное словообразование русских глаголов. Увлекаясь им, иностранец может образовать, например, слово «напобеждал» вместо «начал побеждать».

3. Третья группа ошибок – дискурсивные ошибки - связана уже не с незнанием системы языка, а с неверным использованием этой системы по незнанию норм и ценностей соответствующей культуры. Среди таких ошибок можно выделить:



а. Этикетные – вызваны невладением правилами речевого этикета в другой культуре. Здесь наблюдается процесс интерференции - этикетные нормы своей культуры переносятся в культуру страны изучаемого языка. Так, различия в социально-ролевых аспектах позиций «преподаватель» и «студент» в русском и американском обществах приводит к весьма вольному (с точки зрения русско­го) обращению американских студентов с русскими пре­подавателями (обращение только по имени, да еще и в уменьшительной форме — Дима, Маша, обраще­ние на «ты» и т.п.). Все это может расцениваться русскими как непозволительная фамильярность и приводить к сры­вам коммуникативного взаимодействия.

б. Ошибки в пользовании стереотипами. Д.Б. Гудков относит к стереотипным ошибкам, с одной стороны, неверное использование стереотипных речевых формул (например, стереотипный для русского вопрос «Вы выходи­те на следующей остановке?» может быть воспринят япон­цем как непозволительное вторжение незнакомого чело­века в его личную жизнь и его планы), с другой стороны, неадекватное использование стереотипных образцов разных речевых жанров. Так, для русского официального письма несвойственно использование метафор и сравнений. В то же время ничем не примечательное с точки зрения представителя корейской культуры послание корейских студентов-учащихся МГУ, в котором они обращаются к ректо­ру университета с просьбой снизить плату за обучение, потому что в связи с тяжелым финансовым кризисом в Корее они не могут заплатить требуемую сумму в срок, заканчи­валось словами: «Надеемся, что Вы позволите нам закончить образование и не лишите нас груди матери, которая нас кормит».

К обозначенному типу коммуникативных неудач также относятся ошибки, связанные с различиями в ментальных стереотипах. В частности, англичанин или немец вряд ли поймут, что имеет в виду русский, именующий кого-нибудь чукчей.

4. Энциклопедические ошибки – связаны с невладением фоновыми знаниями, которыми владеют практически все представители инокультурного общества. Так, немецкая студентка, хорошо знающая русский язык, совершенно не поняла, почему ее русский знакомый назвал своего приятеля Левшой, хотя тот, как она заметила, вовсе не был левшой в собственном смысле этого слова.

5. Идеологические ошибки – вызваны различиями в мировоззрении коммуникантов. Одна преподавательница МГУ вела занятия по истории русской литературы в группе студентов-филологов из Монголии, находящихся на высоком уровне владения русским языком. При чтении «Слова о полку Игореве» студенты выразили удивление, что данное про­изведение считается высокохудожественным и относится к чис­лу классических. Они объяснили, что объектом художественно­го изображения никак не может являться позорное поражение, свидетельствующее о бездарности военачальника, который при этом еще и оказался в плену. Поэзия, по их мнению, должна рас­сказывать о великих победах и воспевать подвиги настоящих героев.

Таким образом, приведенная типология коммуникативных ошибок наглядно демонстрирует, что далеко не все коммуникативные неудачи вызваны недостаточным знанием языка общения. Многие из них обусловлены различными экстралингвистическими причинами.

9. Какие аспекты теории конфликтов релевантны для теории МКК?

10. Каковы четыре условия продуктивного межкультурного общения?

 

Результаты опытов Таблица 3.

Группа осадителей Реактивы Характер и цвет осадка Чем обусловлена реакция

 

5. СОДЕРЖАНИЕ ОТЧЕТАОтчет составляется с указанием цели, задания, включая экспериментальные данные, таблицы и выводы. 6. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПРОВЕРКИ

6.1. Какие уровни структурной организации белковой молекулы Вы знаете? Какие связи участвуют в их стабилизации?

6.2. Что такое денатурация белка? Какие уровни структурной организации при этом разрушаются?

6.3. Какие денатурирующие агенты Вам известны? Какие связи в молекуле белка они преимущественно разрушают?

6.4. От чего зависит растворимость белка? Какие факторы стабилизируют белок в растворе?

6.5. Что понимают под обратимым и необратимым осаждением белков? Какие реакции осаждения белков являются обратимыми? Какие реакции осаждения белков необратимы?

6.6. Чем обусловлены необратимые реакции осаждения белков? Применение их в медицинской практике.

6.7. Будет ли коагулировать белок из раствора в присутствии избытка кислоты или щелочи? Почему?

6.8. Будет ли происходить осаждение белка при действии: 1) низких концентраций раствора хлорида натрия; 2) высоких концентраций раствора хлорида натрия; 3) низких концентраций раствора хлорида ртути?

6.9. Что такое высаливание белков? Для каких целей используется высаливание в медицине?

6.10. Чем обусловлен заряд белковой молекулы в растворе?

6.11. Дайте определение изоэлектрической точке белка. Как можно определить ИЭТ белка?

6.12. Определите направление движения белка с pI = 4,6 при фракционировании методом электрофореза в буферном растворе с рН = 8,2.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

1. ЦЕЛЬ РАБОТЫОпределить общий белок в сыворотке крови 2. ЗАДАНИЕ2.1. Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом 3. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Содержание общего белка в сыворотке (плазме) крови можно характеризовать понятиями нормо-, гипо- и гиперпротеинемия, под которыми подразумеваются состояния, сопровождающиеся нормальной (не выходящей за пределы физиологических колебаний), пониженной или повышенной его концентрацией. Нормальное содержание общего белка в сыворотке крови составляет: у взрослых - 65-85 г/л, у новорожденных - 46-60 г/л, у детей до 2 лет – 51-75 г/л, старше 2 лет - 60-85 г/л.

Изменения уровня общего белка могут быть как абсолютными, так и относительными. Последние обычно отмечаются при увеличении (уменьшении) объема крови. Так, гидремия («водное» отравление), обильные вливания раствора глюкозы и других физиологических жидкостей, анурия, гиперсекреция антидиуретического гормона и альдостерона, которые способствуют задержке воды в организме, приводят к развитию относительной гипопротеинемии; при дегидратации (обезвоживании) вследствие потери жидкости при неукротимой рвоте, профузных поносах, холере, несахарном диабете, усиленном потоотделении (лихорадке), полиурии обнаруживается относительная гиперпротеинемия.

При подавляющем большинстве заболеваний внутренних органов, сопровождающихся сдвигами в белковом обмене, обнаруживается гипопротеинемия, носящая обычно вторичный, приобретенный характер (первичная гипопротеинемия встречается сравнительно редко, является генетически детерминированной и возникает вследствие дефектов генов, кодирующих определенные белки сыворотки, например – анальбуминения, агаммаглобулинемия и др.).

Абсолютная гипопротеинемия выявляется при патологических состояниях, при которых наблюдается снижение биосинтеза, усиление катаболизма или увеличение потерь белка. Наиболее частыми причинами ее являются:

1. Недостаточное поступление белка с пищей, наблюдаемое обычно при недоедании, голодании, опухолях, сужении пищевода, нарушении функции желудочно-кишечного тракта (вследствие ухудшения переваривания и всасывания белковых компонентов пищевых продуктов), при продолжительных воспалительных процессах в кишечнике. По мнению А.А. Покровского, даже несбалансированный аминокислотный состав пищи может иногда приводить к гипопротеинемии.

2. Подавление протеосинтетической функции печени, наблюдаемое при паренхиматозных гепатитах, а также интоксикациях, обусловленных длительными нагноительными процессами, злокачественными новообразованиями, действием некоторых химических ядов. Пораженные печеночные клетки, являющиеся местом образования альбуминов, фибриногена и части глобулинов, не в состоянии синтезировать белки плазмы крови в достаточном количестве, вследствие чего развивается гипопротеинемия, обусловленная в основном гипоальбуминемией и гипофибриногенемией.

3. Повышение распада белка в организме, вызванные потребностью в возмещении больших энергетических затрат, связанных с дефицитом пластических ресурсов (ожоговая болезнь, злокачественные новообразования, гипертиреоидизм, гиперкортицизм и т.д.).

4. Потеря белка организмом с кровью при острых и хронических кровотечениях, с мочой при нефротическом синдроме, через поврежденную слизистую кишечника (энтеропатии) и кожу (псориаз, обширные ожоги и др.).

Пониженное содержание белка в плазме крови отмечается и при некоторых физиологических состояниях, например, у женщин в последние месяцы беременности и в период лактации.

Следует отметить, что для обеспечения нормальных процессов жизнедеятельности организм при гипопротеинемии утилизирует прежде всего альбуминовую фракцию белков плазмы крови. При усиленном расходовании альбуминов, обусловливающих в основном онкотическое давление крови, развиваются отеки, которые отмечаются при патологических состояниях, сопровождающихся уменьшением содержания белка в плазме крови ниже 50 г/л. Также хорошо известно, что половина кальция плазмы крови связана с альбумином. Поэтому гипоальбуминемия почти всегда сопровождается гипокальциемией. При этом происходит уменьшение только связанной с белком (физиологически неактивной) фракции кальция, что не приводит к развитию тетании и судорог. Одной из важных функций альбумина является связывание и транспортировка билирубина, свободных жирных кислот и многих лекарственных препаратов (например салицилатов, пенициллина и сульфаниламидов). Связанные с альбумином лекарственные вещества физиологически и фармакологически не активны. Значительное уменьшение альбумина плазмы, приводя к снижению связывающей способности, может повысить уровень свободных фракций указанных выше веществ, результатом чего могут быть токсические эффекты при обычных дозировках лекарственных препаратов.

Абсолютная гиперпротеинемия - явление сравнительно редкое. Обычно она вызывается усилением биосинтеза глобулинов в клеточных элементах системы фагоцитирующих мононуклеаров (вследствие их инфекционного или токсического раздражения) при длительно текущих хронических воспалительных процессах. Это наблюдается, в частности, при хроническом полиартрите, циррозах печени и некоторых хронических процессах.

Значительная и стойкая гиперпротеинемия - до 120 г/л и выше фиксируется при миеломной болезни (плазмоцитоме), макроглобулинемии Вальденштрема, в результате которых в плоских костях черепа появляются дополнительные очаги образования "ненормальных" или патологических белков - парапротеинов. Поэтому, если у больного обнаружено высокое содержание общего белка в плазме крови, его нужно дополнительно обследовать на выявление этих форм аномальных белков.

Обнаружение аномальных белков в сыворотке крови (парапротеинемия) чаще всего наблюдается при патологических состояниях, в основе генеза которых лежат злокачественные новообразования: миеломатоз, на долю которого приходится большинство случаев злокачественных парапротеинемий; В-клеточные лимфомы, в том числе хронические лимфолейкозы; заболевания, связанные с аномалиями тяжелых цепей иммуноглобулинов, к которым относят редко встречающуюся группу заболеваний, характеризующихся накоплением в плазме крови или моче аномального белка, идентифицируемого с фрагментом Н-цепи. К группе парапротеинемий относится и криоглобулинемия, при которой в плазме крови больных выявляется присутствие криоглобулинов, к которым относят белки, выпадающие в осадок при охлаждении проб плазмы крови ниже температуры тела человека. Иногда, особенно если концентрация белка высока, внутрисосудистая преципитация может вызвать такие поражения кожи, как пурпура или феномен Рейно.

Из сказанного выше следует, что гипопротеинемия почти всегда связана с гипоальбуминемией, а гиперпротеинемия - с гиперглобулинемией.

При многих заболеваниях часто изменяется процентное соотношение отдельных белковых фракций, хотя общее количество белка в сыворотке крови остается в пределах нормы. Такое состояние носит название диспротеинемии. Так например, благодаря относительно небольшой молекулярной массе, потери значительных количеств альбумина происходят при условиях, для которых характерно повышение проницаемости биологических мембран, отделяющих плазму крови от межклеточной жидкости. Поэтому при воспалительной реакции организма на повреждение, вследствие увеличения проницаемости сосудистой стенки, происходит «выпотевание» альбуминов в интерстициальную жидкость, что приводит к снижению его концентрации в плазме крови - гипоальбуминемии. Однако при этом в плазме крови резко возрастает доля глобулиновых фракций (прежде всего a-глобулинов, которые включают в свой состав белки-реактанты острой фазы, или g-глобулинов), что как правило не приводит к изменению концентрации общего белка сыворотки. В то же время отмечается резкое изменение соотношения различных белковых фракций плазмы крови.

 

4. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ4.1. Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом

Известные в настоящее время методы количественного определения белков сыворотки крови можно подразделить на колориметрические, основывающиеся на цветных реакциях белков с определенными реактивами; спектрофотометрические, заключающиеся в измерении степени светопоглощения в ультрафиолетовой области и другие. Из колориметрических методов особого внимания заслуживают методы, основанные на биуретовой реакции. Они являются весьма точными, практически доступными и основаны на способности белков реагировать в щелочной среде с сернокислой медью, образуя комплексные соединения фиолетового цвета. При этом различия в интенсивности окрашивания комплексов, образованных альбуминами и глобулинами незначительно, что позволяет использовать данный метод для выявления уровня практически всех белков сыворотки крови.

Ход работы

К 5 мл рабочего раствора биуретового реактива добавляют 0,1 мл сыворотки крови. Через 30 минут пробу колориметрируют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 10 мм при зеленом светофильтре (длина волны 546 нм ) против контроля, который готовят путем прибавления к 5 мл рабочего раствора биуретового реактива 0,1 мл 0,9% NaCI. Расчет ведут по калибровочной кривой.

Построение калибровочной кривой. Из 10% стандартного раствора белка в 0,9% растворе NaCI готовят рабочие стандартные растворы так, как указано в таблице 10 (0,1 мл основного стандартного раствора содержит 0,01 г белка). Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и вносят в пробирки, содержащие 5 мл биуретового реактива. Через 30-60 минут измеряют экстинкцию стандартных проб на ФЭКе против контроля.

Средние значения оптической плотности, соответствующие различным концентрациям, наносят на миллиметровую бумагу. На оси абсцисс откладывают значения концентрации стандартных растворов белка, на оси ординат - соответствующие им величины оптической плотности. Через полученные точки проводят прямую линию.

Данные для построения калибровочного графика для количественного определения концентрации общего белка в сыворотке крови представлены в таблице 4.

 

 

Данные для построения калибровочного графика Таблица 4

 

№ пробирки Стандартный раствор белка, мл 0,9% NaCl, мл Содержание белка в пробе, г Концентрация, г%
0,4 0,6 0,04
0,6 0,4 0,06
0,8 0,2 0,08
1,0 - 0,10
5. СОДЕРЖАНИЕ ОТЧЕТАОтчет составляется с указанием цели, задания, включая экспериментальные данные, таблицы и выводы. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВЫХ АМИНОКИСЛОТ МЕТОДОМ РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ1. ЦЕЛЬ РАБОТЫИзучить хроматографический метод разделения и определения белковых аминокислот. 2. ЗАДАНИЕ2.1. Подготовить носитель.2.2. Провести хроматографию на бумаге отдельных аминокислот.2.3. «Проявить» хроматограмму.2.4. Определить коэффициенты распределения аминокислот.2.5. Провести разделение и определение аминокислот в исследуемом растворе.2.6. Сделать выводы и оформить отчет. 3. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ Для быстрого разделения белковых аминокислот широко используют метод круговой хроматографии на бумаге. Хроматография на бумаге является одной из разновидностей распределительной хроматографии. Распределительная хроматография основана на различной растворимости разделяемых веществ в двух (или нескольких) малосмешивающихся (или несмешивающихся) жидкостях. Одна из жидкостей должна быть полярной, а другая – неполярной.Аминокислоты обладают различной растворимостью. Более гидрофобные лучше растворяются в неполярных растворителях (подвижная фаза), а гидрофильные – в полярных (неподвижная фаза). В качестве носителя неподвижного растворителя применяют чистую целлюлозу в виде специальной фильтровальной бумаги. Хроматографическая бумага должна обладать высокой чистотой и равномерной плотностью. Неподвижной фазой в бумажной хроматографии в большинстве случаев является вода, всегда присутствующая в фильтровальной бумаге. В качестве подвижной фазы выступают различные органические вещества или их смеси, предварительно насыщенные водой. Техника бумажной хроматографии состоит в следующем. На хроматографическую бумагу на место старта наносится капля исследуемой смеси. Бумага высушивается при комнатной температуре и помещается в закрытый сосуд (хроматографическую камеру), в котором она непрерывно смачивается растворителем. Растворитель при этом равномерно распределяется по бумаге в определенном направлении. Вещества, входящие в состав смеси, вместе с ним перемещаются по бумаге в том же направлении, но с различной скоростью, и поэтому концентрируются на разном расстоянии от места старта. Чем меньше растворимость аминокислоты в воде и чем больше ее растворимость в феноле или другом органическом растворителе, тем быстрее она будет двигаться вместе с ним и тем дальше будет концентрироваться от места старта. Наоборот, чем больше растворимость аминокислоты в воде и чем меньше ее растворимость в органическом растворителе, тем медленнее она будет двигаться вместе с ним, концентрируясь вблизи от места старта. Если разделяемые вещества не окрашены, хроматограмму «проявляют», т. е. проводят качественные реакции или обнаруживают их другими методами. Идентификация каждого компонента по окрашенному пятну производится на основании расчета величины коэффициента распределения (Rf). Коэффициент распределения вещества равен отношению расстояния Х (в мм), пройденного веществом от места его нанесения (места старта) до фронта пятна, к расстоянию Y (в мм), пройденному растворителем от места старта до фронта растворителя:Rf = Х/Yгде Х – расстояние, пройденное веществом от места старта до фронта пятна, мм;Y – расстояние, пройденное растворителем от места старта до фронта растворителя, мм. Коэффициент распределения для каждого соединения индивидуален. Он зависит от многих факторов: температуры, состава растворителя, качества бумаги и т. д. Поэтому Rf является постоянной величиной только при данных конкретных условиях. Зная значение Rf отдельных веществ, можно определить состав смеси, идентифицировав входящие в нее вещества. Для этого надо провести хроматографическое разделение смеси в условиях, аналогичных тем, при которых определялись коэффициенты распределения веществ, входящих в ее состав. Радиальную хроматографию на бумаге проводят в чашках Петри. В этом случае растворитель перемещается от центра круга к периферии, перенося с собой аминокислоты, которые концентрируются на различном расстоянии от центра, образуя круги. Их можно обнаружить, проведя нингидриновую реакцию. Хроматография широко применяется для разделения малых количеств веществ, которые близки по своему составу и свойствам, в частности для определения аминокислотного состава белка и различных биологических жидкостей. 4. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ4.1. Подготовка носителя Для проведения круговой хроматографии на бумаге носитель готовят из хроматографической бумаги. Для этого вырезают из нее квадрат, сторона которого на 5–10 мм больше диаметра чашки Петри. Затем делают два параллельных разреза приблизительно на расстоянии 3–4 мм друг от друга от середины одной из сторон до центра квадрата. При всех операциях бумагу держат только за углы. Образовавшуюся полоску отгибают перпендикулярно плоскости диска так, чтобы образовался четкий сгиб. Проделывают это, держась пальцами за самый конец полоски. После образования сгиба конец, к которому прикасались пальцы, срезают ножницами.4.2. Проведение хроматографию на бумаге отдельных аминокислотНа место сгиба наносят 1 каплю раствора аминокислоты и высушивают на воздухе. В хроматографическую камеру, которая представляет собой закрытый сосуд, образованный двумя одинаковыми по диаметру крышками или донышками чашки Петри, наливают растворитель, который предварительно тщательно перемешивают. Хроматографическую бумагу помещают в хроматографическую камеру так, чтобы отогнутая полоска находилась в растворителе. Постепенно растворитель перемещается по полоске и смачивает бумагу. Когда фронт растворителя на бумаге будет иметь диаметр 80–90 мм, ее достают из камеры и карандашом отмечают границу фронта растворителя. После этого бумагу сразу же помещают в сушильный шкаф при температуре 70–80ºС на 8–10 мин для удаления растворителя и фиксации аминокислот.Внимание! Достав бумагу из камеры, ее нужно как можно быстрее поместить в сушильный шкаф, так как ее подсушивание при комнатной температуре может привести к неправильным результатам.4.3. «Проявление» хроматограммыВ ванночку наливают раствор нингидрина. Высушенную бумагу быстро окунают в него, кладут на грани сухой крышки (или донышка) чашки Петри и сразу же (немедленно!) помещают на 5–6 мин в сушильный шкаф при температуре 90–100°С. После высушивания на диске появляется кольцо соответствующей аминокислоты.4.4. Определение коэффициентов распределения (Rf) индивидуальных аминокислотПри помощи линейки измеряют расстояние, которое прошла каждая из аминокислот от места старта (места нанесения аминокислоты) до фронта пятна, и расстояние, которое прошел растворитель. После этого по формуле (1) вычисляют значение коэффициента распределения (Rf) для каждой аминокислот.4.5. Проведение хроматографического разделения аминокислот в контрольном раствореХроматографическое разделение аминокислот в контрольном растворе проводят аналогично пп. 4.1–4.4. Определяют коэффициенты распределения для всех проявившихся на хроматограмме аминокислот (аналогично п. 4.5). Сравнивают полученные значения Rf со значениями коэффициентов распределения индивидуальных аминокислот и определяют, какие аминокислоты находились в исследуемом растворе.4.6. Делают выводы о разделении и определении аминокислот методом круговой хроматографии на бумаге.5. СОДЕРЖАНИЕ ОТЧЕТАОтчет составляется с указанием цели, задания, принципа хроматографического метода, включает экспериментальную часть и выводы. В экспериментальной части отражаются этапы проведения работы с кратким их описанием, проводятся расчеты коэффициентов распределения аминокислот и делаются выводы. Полученные хроматограммы с указанием, каким аминокислотам они принадлежат, прикладываются к отчету. 6. КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ6.1. В чем сущность распределительной хроматографии?6.2. Каковы особенности хроматографии на бумаге?6.3. В чем состоит техника бумажной хроматографии?6.4. Как производится идентификация компонентов в разделяемой смеси?6.5. Что называют коэффициентом распределения?6.6. В каких случаях применяют метод хроматографии и чем он удобен?

 


Дата добавления: 2015-01-10; просмотров: 45; Нарушение авторских прав


<== предыдущая лекция | следующая лекция ==>
Прокомментируйте факторы понимания в межкультурной коммуникации. | ХРОМОПРОТЕИДЫ
lektsii.com - Лекции.Ком - 2014-2019 год. (0.024 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав
Главная страница Случайная страница Контакты