КАТЕГОРИИ:
АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Определение сиаловых кислот в сыворотке крови методом Гесса.
2.5. Сделать выводы и оформить отчет. 3. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
Гликопротеиды - это сложные белки, простетической группой которых являются углеводы или их производные. У некоторых гликопротеидов углеводная часть непрочно связана с белком может легко от него отделяться. Простетические группы некоторых гликопротеидов могут встречаться в тканях и в свободном состоянии.
В состав углеводной группы могут входить гексозы, гексозамины, гексуроновые кислоты, фукоза, сиаловые кислоты, хондроитинсульфаты, гепарин, гепаринсульфаты, гиалуроновая кислота, именуемые гликозаминогликанами (или мукополисахаридами).
В зависимости от состава различают кислые и нейтральные мукополисахариды. К кислым относятся гиалуроновая кислота и гепарин. Молекула гиалурновой кислоты построена из остатков глюкуроновой кислоты и ацетилглюкозамина. Гиалуроновая кислота входит в состав соединительной ткани, роговицы глаза, сердечных клапанов. В состав нейтральных мукополисахаридов входят нейтральные сахара (галактоза, манноза). Нейтральные мукополисахариды входят в состав слизистых секретов – слюны, желудочного сока, плазмы крови. Углевод-белковые комплексы делятся на гликопротеиды и протеогликаны. Углеводная часть гликопротеидов представлена небольшими гетерополисахаридами или олигосахаридами нерегулярного строения. Белок в них составляет 80-90% массы макромолекулы. Для гликопротеидов типична ковалентная гликозидная связь, которая возникает между углеводным компонентом и амидной группой аспарагина в белках (N-гликозидная связь; например в иммуноглобулинах, ферментах и гормонах) или О-гликозидная, когда моносахарид связан с ОН-группой серина или треонина (в муцинах), а иногда с ОН-группой гидроксилизина или гидроксипролина (коллагены). Простетическая группа протеогликанов представлена гликозаминогликанами – гетерополисахаридами, имеющими регулярное строение. На долю белковой части при этом приходится всего 2-10% массы макромолекулы. Между белковыми и углеводными компонентами в протеогликанах могут возникать как ковалентные гликозидные, так и ионные связи вследствие того, что их углеводный фрагмент имеет большой отрицательный заряд при физиологических значениях рН. Основная масса протеогликанов сосредоточена в соединительной ткани, составляя основное ее вещество. Интересно заметить, что вещества групп крови, у которых полисахариды составляют до 80% массы макромолекулы, но имеют нерегулярное строение, не могут быть полностью отнесены ни к гликопротеидам, ни к протеогликанам. Поэтому их можно выделить в отдельную группу углевод-белковых комплексов 4. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ4.1. Выделение муцина из слюны и мукоидов из ткани аорты и обнаружение углеводного компонента в их составеХод работы
4.1.1. В пробирку собирают около 2 мл слюны. Затем по каплям (4-5 капель) под тягой! прибавляют концентрированную уксусную кислоту. Выделяется осадок муцина, трудно растворимый в избытке уксусной кислоты. С осадком проводят реакции Подобедова-Молиша и биуретовую.
4.1.2. Ткань аорты (0,5 г) растирают в течении 15 минут в фарфоровой ступке с щепоткой стеклянного песка, добавляя 10 мл 3% раствора уксусной кислоты. Полученную смесь фильтруют через складчатый фильтр и с фильтратом, содержащим гликопротеиды, проделывают нафтоловую пробу Подобедова-Молиша и биуретовую реакцию.
4.1.3. Нафтоловая проба на углеводную группировку муцина (реакция Подобедова-Молиша). К сгустку муцина добавляют 1-2 капли 1% спиртового раствора a-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно приливают 10-20 капель концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости постепенно появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо заметное на белом фоне. При замене a-нафтола 1 % раствором тимола образуется более отчетливое красное кольцо.
Реакция обусловлена присутствием в муцине углеводной группировки, которая при действии концентрированной серной кислоты превращается в оксиметилфурфурол. Последний, конденсируясь с a-нафтолом, превращается в окрашенное в фиолетовый цвет соединение.
4.2. Открытие углеводного компонента в муцинеХод работы
4.2.1. Реакция МолишаРеакция Молиша является качественной реакцией на пентозу. Для ее проведения часть сгустка муцина переносят в пробирку, добавляют 1% раствор тимола в количестве равном 1/3 объема муцина, и тщательно перемешивают. Затем осторожно, по стенке, прибавляют концентрированную серную кислоту в объеме, в 8-10 раз превышающем затраченный объем тимола, и несколько раз хорошо встряхивают пробирку. При встряхивании на дне пробирки образуется продукт конденсации фурфурола с тимолом, который имеет красный цвет.Внимание! Эту реакцию проводят только в сухой пробирке.4.2.2. Реакция с α-нафтоломРеакция с α-нафтолом является качественной реакцией на углеводы. Часть сгустка муцина переносят в пробирку, добавляют к нему приблизительно двукратный объем 0.2 %-ного спиртового раствора α-нафтола, 20 капель концентрированной серной кислоты и хорошо перемешивают. Появление розово-фиолетового окрашивания говорит о присутствии в муцине углеводов.Внимание! Эту реакцию проводят только в сухой пробирке.4.3. Определение в муцине белкового компонентаХод работы
Белки в муцине обнаруживают с помощью биуретовой реакции. Для этого берут пробирку и переносят в нее часть сгустка муцина, прибавляют к нему равный объем 10 %-ного раствора NaOH и в 5 раз меньше 1%-ного раствора CuSO4. Все тщательно перемешивают и наблюдают за изменением цвета (появляется сине-фиолетовая окраска).Дата добавления: 2015-01-10; просмотров: 165; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав |