КАТЕГОРИИ:
АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Краткая характеристика нуклеиновых кислот клеток высших организмов
Таблица 5.
| Тип нуклеиновой кислоты | Молекулярная масса | Локализация в клетке | Функция |
| ДНК | 1011 | Ядро Митохондрии | Хранение генетической информации и участие в передаче ее дочерней ДНК при делении клетки или РНК в биосинтезе белка |
| мРНК | 4×104 – 1,2×106 | Ядро Цитоплазма | Является копией участка ДНК, содержащего информацию о структуре молекулы белка. Переносит информацию от ДНК к рибосомам – месту синтеза белка |
| тРНК | 2,5×104 | Гиалоплазма, рибосомы, митохондрии | Участвует в активировании аминокислот, их транспорте к рибосомам и сборке из аминокислот белков |
| рРНК | 4×104-1,75×106 | Рибосомы | Образует скелет рибосом, который окутывается белками. Играет вспомогательную роль при сборке белка на рибосомах |
Ход работы
Для получения рибонуклеопротеидов в ступку помещают 10 г дрожжей. Добавляют 4 мл водно-эфирной смеси (1:1) и перемешивают. Затем добавляют 5 г кварцевого песка и тщательно растирают, приливая небольшими порциями 50 мл 0.4% NaOH. Полученную массу растирают не менее 15 минут, после чего суспензию фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют. Полученный осадок выбрасывает, а фильтрат (центрифугат) собирают, помещают в стакан и понемногу добавляют 10% раствор уксусной кислоты (около 5-6 мл). после каждого прибавления проверяют лакмусовой бумажкой реакцию среды. Кислоту добавляют до тех пор, пока реакция среды не станет слабокислой. В этих условиях нуклеопротеиды выпадают в осадок. Полученную суспензию центрифугируют, фильтрат сливают и отделяют осадок нуклеопротеидов.4.2. Гидролиз нуклеопротеидовдрожжей.
Для изучения химического состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей, богатых нуклеопротеидами, и выявляют продукты гидролиза - полипептиды, пуриновые основания, углевод и фосфорную кислоту специфическими для каждого вещества реакциями.
Ход работы
В большую широкую пробирку (15х1,5 см) помещают 0,5 г свежих пекарских или 0,1 г сухих дрожжей и заливают 4 мл 10% раствора серной кислоты. Пробирку закрывают пробкой, холодильником в которой служит стеклянная трубка длиной 25-30 см, и ставят на асбестовую сетку. Через 1 час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, дают содержимому остыть, фильтруют и в фильтрате определяют продукты гидролиза нуклеопротеидов.
4.3. Качественные реакции на продукты гидролиза нуклеопротеидов
Определение белков и пептидовПри проведении гидролиза при условиях, указанных в п.4.2, белки подвергаются ему лишь частично и расщепляются только для пептидов. Белки и пептиды в гидролизате обнаруживают с помощью биуретовой реакции.
Ход работы
Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора NаОН и одну каплю 1% раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.
4.4. Открытие пуриновых основанийСеребряная проба на пуриновые основания. 10 капель гидролизата нейтрализуют одной каплей аммиака и добавляют 5 капель 1% раствора азотнокислого серебра. Через 3-5 минут выпадает рыхлый бурый осадок серебряных соединений пуриновых оснований (аденина, гуанина).4.5. Открытие пентозОбнаружение пентоз основано на их дегидратации концентрированными кислотами с образованием фурфурола, который дает с тимолом (реакция Молиша), α-нафтолом и орцином окрашенные соединения.Внимание! Эти реакции проводят только с сухих пробирках.Рибозу и дезоксирибозу можно открыть реакцией с дифениламином, который с рибозой дает зеленой окрашивание, а с дезоксирибозой – синее.4.5.1. Реакция МолишаХод работы
Качественная реакция Молиша на рибозу и дезоксирибозу. К 10 каплям гидролизата дрожжей добавляют 2-3 капли 1% спиртового раствора тимола или a-нафтола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки появляется красное окрашивание вследствие образования продуктов конденсации фурфурола с тимолом или a-нафтолом.
4.5.1.1. В пробирку наливают 10 капель гидролизата, добавляют 1-2 капли 0.1%-ного раствора α-нафтола и хорошо перемешивают. Затем осторожно, по стенке пробирки, приливают 10-15 капель концентрированной серной кислоты. При стоянии на границе раздела двух фаз появляется фиолетовое окрашивание.4.5.1.2. В пробирку наливают 10 капель гидролизата, добавляют 10-15 капель орцина и 10-15 капель концентрированной серной кислоты. Смесь нагревают до кипения и наблюдают появление окрашивания (зеленого или розово-красного).4.5.2. Открытие рибозы и дезоксирибозыХод работы
Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 30% раствора едкого натра и 1-3 капли 7% раствора сернокислой меди до появления стойкого осадка гидроокиси меди. Жидкость перемешивают и нагревают до кипения. В результате выпадает красный осадок закиси меди или желтый осадок гидрата окиси меди вследствие окисления рибозы и восстановления гидрата окиси меди в гидрат закиси меди.4.6. Обнаружение фосфорной кислотыХод работы
4.6.1. Молибденовая проба. К 20 каплям молибденового реактива (раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте) добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на огне. В присутствии фосфорной кислоты жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении выпадает желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорно-молибденовокислого аммония (NH4)3PO4 x 12MoO3.Результаты работы заносят в таблицу 6:
Результаты опыта Таблица 6.
| Название сложного белка | Простетическая группа | Наименование реакции, обнаруживающей компоненты протеида | Употребляемые реактивы, условия проведения реакции | Чем обусловлена реакция |
6.1. Какие виды нуклеопротеидов Вы знаете? Чем представлена их простетическая группа? Как связаны между собой белковая и небелковая части нуклеопротеидов?
6.2. Дайте определение нуклеозида, нуклеотида, нуклеиновой кислоты. В чем отличие перечисленных соединений друг от друга?
6.3. Какие типы нуклеиновых кислот Вам известны? В чем их отличие друг от друга?
6.4. Что представляет собой вторичная структура ДНК и РНК? Имеются ли отличия между этими молекулами по вторичной структуре? В чем они заключаются?
6.5. Какие способы выделения нуклеопротеидов существуют и на чем они основаны?6.6.Напишите схему гидролитического распада нуклеопротеидов. Назовите конечные продукты этого процесса.
6.7. Где в клетке локализуется ДНК?
6.8. При помощи каких связей соединены в нуклеотиде друг с другом основание и сахар, сахар и фосфорная кислота?6.9.Какие ткани наиболее богаты дезоксирибонуклеопротеидами? Какие физико-химические свойства лежат в основе выделения ДНП из тканей?6.10. Какие качественные реакции характерны для составных частей нуклеопротеидов? Какие компоненты нуклеопротеидов они обнаруживают?
6.11. Какие виды РНК Вам известны? В чем биологическое значение их существования? Где локализуются эти молекулы в клетке? Какие вещества называют нуклеопротеидами?
ГЛИКОПРОТЕИДЫ1. ЦЕЛЬ РАБОТЫИзучить состав и строение гликопротеидов. 2. ЗАДАНИЕ2.1. Выделить муцин из слюны и мукоидов из ткани аорты и обнаружить углеводный компонент в их составе.
2.2. Провести реакции, доказывающие присутствие углеводного компонента в муцине.2.3. Провести реакции, доказывающие присутствие белкового компонента в муцине.Дата добавления: 2015-01-10; просмотров: 263; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав |