ЗАДАЧА 20

Как известно, под названием «антибиотики» объединены веще­ства, образуемые одними микроорганизмами для подавления роста…

Вариант ответа

Скрининг (поиск и отбор) продуцентов антибиотиков может быть ненаправленным (первичным), когда отбирают наиболее активные микроорганизмы-продуценты по способности продуцировать анти­биотики или другие БАВ. Направленный скрининг — поиск и отбор продуцентов антибиотиков определенного химического строения или с определенным механизмом антагонистического действия.

Схема скрининга:

• приготовление стерильных питательных сред;

• приготовление почвенной суспензии;

• посев на агаризованную среду;

• выделение микроорганизмов-продуцентов антибиотиков в виде чистых культур;

• хранение микроорганизмов-продуцентов и оценка их способно­сти продуцировать антибиотики.

Образцы почв с большим разведением высевают на твердые пита­тельные среды в чашках Петри, чтобы получить фактически из одной клетки штамм почвенных микроорганизмов (штамм — это культура, выросшая из одной клетки). Далее определяют физиологические параметры штамма, его антибиотическую активность, которую оце­нивают по зоне отсутствия роста на твердых питательных средах тех или иных бактерий вокруг посеянного штриховым способом изучаемого штамма, или по зоне отсутствия роста вокруг лунки в агаре, или же вокруг впаянного в агар металлического цилиндра (без дна), заполненного культуральной жидкостью исследуемого штамма. Существует два варианта определения антибиотической активности на основе метода диффузии в агар с последующим сравнением разме­ров зон угнетения роста тест-организмов, образующихся при испыта­нии растворов стандартного образца и испытуемого препарата:

• трехдозный, когда для проведения анализа готовят по три кон­центрации растворов стандартного и испытуемого образцов;

• однодозный с использованием стандартной кривой в полулога­рифмической сетке. В чашках Петри с тест-организмом вырезают лунки диаметром 8 мм или ставят цилиндрики, в которые вносят пипетками опытные растворы и стандартные образцы в объеме 0,05 мл; чашки термостатируют 18 ч при 37 °С.

Расчет активности производят в соответствии с ГФ (издание XI, вып. 2, 1990 г., с. 210).

При сравнении антибиотиков с антисептиками прежде всего необ­ходимо отметить избирательность действия первых на метаболизм (из нескольких тысяч реакций они подавляют одну или несколько). Кроме того, антибиотики высокоактивны и угнетают рост микроор­ганизмов в концентрации порядка 1 мкг/мл или меньше.