Взятие капиллярной крови

1.Заранее наливают в пробирки соответствующие реактивы: для определения СОЭ ­в капилляр Панченкова набирают (до метки 0,75) реактив 3% цитрат натрия; для определения концентрации гемоглобина- 5 мл трансформирующего раствора; для подсчета числа эритроцитов - 4 мл 0,9% раствора натрия; для подсчета числа лейкоцитов - 0,4 мл 3% уксусной кислоты.

2.Тщательно протерев кожу пальца марлевым шариком, смоченным спиртом, делают укол копьем.

3.Первую выступившую каплю крови вытирают, из следующих капель крови быстро набирают необходимое количество в пробирки с реактивами.

9.Начинают взятие с разведения крови для определения СОЭ. В капилляр Панченкова, промытый в реактиве набирают кровь до метки 0 и тщательно выдувают ее в пробирку с цитратом натрия. Соотношение крови и реактива 4: 1. Набирают в капилляр смесь крови с цитратом до метки 0. Устанавливают капилляр строго вертикально в штатив. Через час отмечают СОЭ по высоте отстоявшегося слоя плазмы в мм. Принцип. Смесь крови с цитратом натрия при стоянии разделяется на 2 слоя (нижний - эритроциты, верхний - плазма). При этом РОЭ, величина столбика плазмы, различной в зависимости от изменений физико-химических свойств крови.

4.Мякоть пальца вытирают сухим тампоном, затем надавливают на палец и собирают выступившую кровь для определения эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов.

5.Для подсчета числа эритроцитов кровь берут в количестве 0,02 мл в пипетку и выдувают ее в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия.

6.Для определения концентрации гемоглобина в сухую стерильную пипетку Сали 0,02 мл набирают кровь до метки, выдувают ее в пробирку с трансформирующим раствором и несколько раз ополаскивают ее в этом растворе. Снова вытирают место укола и выдавливают каплю крови.

7.Для подсчета лейкоцитов кровь берут пипеткой до метки 0,02 мл и выдувают ее в пробирку с 3% уксусной кислотой, промывают несколько раз в растворе.

8.Для исследования лейкоцитарной формулы, морфологии эритроцитов, тромбоцитов готовят мазки крови: вытирают место укола сухим марлевым шариком и наносят каплю крови на предметное стекло, затем готовят тонкие мазки с помощью шлифованного стекла.

Для исследования крови на гематологическом анализаторе кровь берется в одноразовые микропробирки с ЭДТА. Для исследования может быть использована венозная кровь, взятая в пробирки с ЭДТА (сиреневая пробка).

10.Определение количества ретикулоцитов, тромбоцитов, пробирочный метод по Фонио с окраской мазков по Алексееву.

11.Исследование крови на малярийный плазмодий. Берется капиллярная кровь как для исследования лейкоцитарной формулы, готовятся мазки. Затем берется кровь для приготовления «толстой капли».

12.Для выявления клеток красной волчанки используется венозная кровь. В лаборатории готовиться лейкоконцентрат с последующим приготовлением мазков крови на стекле и их окраской по Романовскому-Гимзе.

Содержание гемоглобина в крови(Унифицированный гемиглобинцианидный метод).

Принцип:Гемоглобин окисляют в метгемоглобин железосинеродистым калием; образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин определяют колориметрически.

Ход определения.В пробирку к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл капиллярной крови (разведение в 251 раз). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10 мин. Измеряют на КФК-3 при длине волны 560 нм (зел. светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансф. р-р) оптическую плотность пробы.

Расчет содержания гемоглобина производят по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемиглобинцианида в соответствии с инструкцией к набору стандартных растворов.

Подсчет к-ва эритроцитов(унифицированный метод подсчета в счетной камере Горяева)

Принцип:Подсчет эритроцитов под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведения крови.

Ход исследования.Разводят исследуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую пробирку отмеривают 4 мл реактива. Пипеткой Сали набирают 0,02 мл капиллярной крови и выдувают в пробирку с раствором. Пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять до момента счета (в ближайшие 2-3 часа после взятия крови). При гемолитических и В 12-дефицитных анемиях - сразу после взятия.

Подготавливают счетную камеру.Протирают камеру с сеткой и покровное стекло, притирают стекло к камере. Заполняют счетную камеру разведенной кровью, оставляют на 1 мин для оседания эритроцитов. Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах), по диагонали.

Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят, исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого квадрата (1/4000 мкл), по формуле Х=А*4000*200/80, где Х-число эритроцитов в 1 мкл крови, А- число сосчитанных эритроцитов. В результате сокращения Х= А*10000.

Подсчет количества лейкоцитов(унифицированный метод подсчета в счетной камере).

Принцип. Подсчет лейкоцитов под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови (1 л в системе СИ), исходя из объемов квадратов и разведения крови.

Ход определения. Разводят исследуемую кровь в 20 раз, для этого в сухую пробирку наливают 0,4 мл уксусной кислоты. Набирают из пальца 0,02 мл крови. Выдувают кровь из пипетки на дно пробирки с раствором, оставляют до момента счета, не более чем на 2-4 часа после взятия крови.

Подготавливают счетную камеру. притирают стекло к камере. Заполняют камеру разведенной кровью, оставляют на 1 мин. Считают лейкоциты в 100 больших квадратах с малым увеличением (10х8), по всей сетке. Расчет числа лейкоцитов проводят, исходя из разведения крови (20), числа сосчитанных квадратов (100) и объема одного большого квадрата (1/250 мкл).

Х=А*250*20/100, Х=А*50, где х- число лейкоцитов в 1 мкл крови, А- число лейкоцитов в 100 больших квадратах.