Изготовление нативных препаратов (содержащих живые клетки) микроорганизмов

Для изучения живых клеток микроорганизмов применяют препараты «раздавленная капля», «висячая капля», «отпечаток», «агаровая пленка» («микрокультура»). Эти препараты можно использовать как для оценки подвижности бактерий, так и для оценки прижизненной формы микроорганизмов, их жизненных циклов, особенностей размножения и формирования покоящихся форм.

С использованием темнопольной микроскопии изучают препараты типа «раздавленная капля». На предметное стекло наносят каплю стерильного физиологического раствора, помещают в нее небольшое количество клеток изучаемых микроорганизмов, размешивают и накрывают покровным стеклом. При этом предметные стекла должны быть не толще 1,1-1,2 мм, а покровные 0,17 мм, без царапин и загрязнений. При приготовлении препарата следует избегать наличия пузырьков и крупных частиц (эти дефекты будут видны ярко святящимися и не позволят наблюдать препарат). Микроорганизмы, выращенные или на плотной, или в жидкой питательной среде, переносят в каплю воды бактериологической петлей; выращенные в жидкой среде можно переносить также стерильной пипеткой. В последнем случае каплю воды на предметное стекло можно не наносить. Капля исследуемого материала должна быть настолько мала, чтобы из-под покровного стекла не выступал избыток жидкости. Если он образовался, его необходимо удалить фильтровальной бумагой. При продолжительном изучении микроскопируемого объекта края покровного стекла рекомендуется залить лаком для ногтей, что предотвратит быстрое высыхание препарата.

Препарат «раздавленная капля» используют для установления форм клеток микроорганизмов, их размеров, взаимного расположения, способа размножения.

Препарат «висячая капля». Для приготовления препарата каплю суспензии микроорганизмов петлей или обычным пером наносят на покровное стекло, которое поворачивают каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением (лункой) в центре. Капля должна свободно висеть, не касаясь краев и дна лунки. Края лунки предварительно смазывают вазелином. Капля оказывается герметизированной во влажной камере, что делает возможным многодневное наблюдение за объектом. Для длительных наблюдений используют стерильные стекла, а суспензию микроорганизмов готовят в жидкой питательной среде.

Препарат «висячая капля» используют для наблюдения за ростом и размножением микроорганизмов, образованием и прорастанием спор, установления подвижности клеток.