Методы культивирования анаэробных микробов

Анаэробные условия для выращивания анаэробных микро­организмов можно создавать физическими, химическими и био­логическими методами.

1. Физические методы:

· создание вакуума в специальных аппаратах (анаэростат);

· замена воздуха индифферентным газом (анаэростат);

· затруднение доступа кислорода (культивирование в глу­бине столбика агара на среде Вильсона-Блера № 1 – метод Вейнберга или в запаянных стеклянных трубках с агаром – ме­тод Виньяль-Вейона).

2. Химические методы:

§ культивирование на плотных питательных средах в спе­циальных аппаратах, в которых кислород поглощается химиче­скими веществами (аппарат Аристовского, эксикатор):

§ культивирование в жидких средах в присутствии редуци­рующих веществ (аскорбиновая кислота, тиогликолевая кислота и др.).

3. Биологические методы:

© культивирование па плотных питательных средах в гер­метически закупоренных чашках Петри, в которых кислород по­глощается специально засеянным аэробом (метод Фортнера):

© культивирование в жидких средах, содержащих адсор­бенты для кислорода (кусочки паренхиматозных органов - сре­да Китта-Тароцци, вату и пр.).

В качестве субстрата дыхания в среды для выращивания анаэробов добавляется глюкоза.

Применяемые для культивирования анаэробов среды долж­ны перед засевом подвергаться регенерированию (т.е. освобож­дению от растворенного кислорода) путем кипячения в водяной бане в течение 20-30 минут с последующим быстрым охлажде­нием. После засева жидкие среды заливаются слоем стерильного вазелинового масла.

Для выделения чистых культур анаэробов из смеси с аэроб­ными микробами засевают исследуемый материал на обогати­тельную среду (Китта-Тароцци и др.). Если искомые микробы яв­ляются спороносными, то можно прогревать засеянные пробир­ки при 80°С для уничтожения сопутствующей аспорогенной флоры. После суточной инкубации в термостате делают высев на чашки с плотными питательными средами и помещают их затем в анаэростат или в высокий столбик агара в узких пробирках (метод Вейнберга) для получения отдельных колоний анаэробов.

Самостоятельная работа студента на практическом занятии по теме: «Бактериологический анализ, культивирование анаэробов»

Оформление альбома:

· записать в виде таблицы схему описания колоний;

· зарисовать пробирки, демонстрирующие характер роста на жидких средах и пигментообразующие бактерии.

Тема:«Ферменты бактерий. Биохимическая активность микробов, бактериологический метод исследования (продолжение)»

Цель:

– освоить бактериологический метод иссле­дования.

Задачи:

– овладеть навыками идентификации чистой культуры

микроорганизмов;

– уметь определять сахаролитическую, протеолитическую активность

и редуцирующую способность микроорганизмов, правильно

оценивать полученные результаты.

В основе метаболических реакций, протекающих в клетке, лежит деятельность ферментов – особых белков, которые явля­ются биокатализаторами. Ферменты обеспечивают протекание реакции в физиологических условиях Микробы синтезируют разнообразные ферменты.

Эндоферменты — функционируют в клетке и находятся и цитоплазме.

Экзоферменты — выделяются в окружающую среду.

Конституционные ферменты — постоянно присутствуют и клетке в одинаковых концентрациях.

Изучение биохимических свойств бактерий в медицинской микробиологии является одним из основных методов при идентификации вида возбудителя. Особое значение этот метод имеет вдиагностике кишечных инфекций (колиэнтеритов, брюшного тифа, сальмонеллезов, дизентерии).

Длябиохимической дифференциации выделенной культуры определяются сахаролитические и протеолитические свойства. Для обнаружения этих свойств делают посев на дифференциаль­но-диагностические среды, содержащие вещества, в отношении которых бактерии способны проявлять ферментативную актив­ность.

Таблица 2