Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника



В опыте из конъюгационной смеси на среде Эндо со стрептомицином вырастают колонии реципиента и рекомбинанта.




Читайте также:
  1. III.3.1. Хроматограмма как источник сведений о количественном составе анализируемой смеси
  2. Африка и юг Азии как колонии: общность исторических судеб и ее первопричины
  3. БЕЗНАПОРНОЕ ДВИЖЕНИЕ ЖИДКОСТИ В ПОРИСТОЙ СРЕДЕ
  4. Безопасность исполнения кода и разграничение прав пользователя в среде УУМ-32
  5. В выводе необходимо отметить, образуют ли исследуемые вещества химические соединения; температуру плавления и состав эвтектической смеси.
  6. В настоящее время в молодежной среде нашей страны наблюдается ряд негативных тенденций и явлений.
  7. В пористой среде
  8. Взрыв газопаровоздушной смеси.
  9. Виды рисков в среде человека

Как их отличить?

Подсчитайте число колоний рекомбинанта и рассчитайте частоту передачи признака ферментации лактозы по формуле:

где: К - частота передачи признака;

n - число колоний рекомбинанта;

d - число клеток донора в конъюгационной смеси.

Зарисуйте схему опыта. Учтите результаты.

2. Опыт «Конъюгация 2»: передача плазмидного признака рези-стентности к тетрациклину (R Тc).

Донор: E.сoli M 17 Lac+ Sms (R Тc).

Реципиент: S.flexneri- Lac- Smr Tcs

Рекомбинант: ? (назовите его и укажите генетическую ха­рактеристику по указанным маркерам).

К 5 мл суточной бульонной культуры реципиента добавьте 0,5 мл суточной бульонной культуры донора (густота 5х108 м.т./мл). Смесь поместите в термостат на 30-40 минут, после чего сделай­те высев 0,1 мл на селективную среду Эндо со стрептомицином и тетрациклином.

Контроли:

1) посев донора и реципиента на среду Эндо со стрептомицином;

2) посев донора и реципиента на среду Эндо с тетрациклином;

3) посев донора и реципиента на среду Эндо со стрептомицином и тетрациклином.

Произведите учет результатов через 18-24 часа. Зарисуйте результаты эксперимента. Чьи колонии выросли из конъюгационной смеси на среде Эндо+Тс+Sm? Рассчитайте частоту переда­чи признака тетрациклино- резистентности по выше приведенной формуле (см. задание к опыту № 1).

 

3. Опыт по трансдукции: передача триптофанового признака (tгр+) у сальмонелл трансдуцирующим фагом Р 22.

Донор; S. typhimurium trp+ (лизогенный штамм по фагу Р 22)

Реципиент: S. typhimurium trp-

Трансдуцирующий фаг: Р 22

Рекомбинант: ? (назовите)

Пояснение: штамм донора является прототрофом по триптофану, т. е. сам синтезирует эту аминокислоту, имея в со­ставе генома гены tгр+, кодирующие этот синтез. Геном этих бак­терий также содержит профаг фага Р 22.

Его локус в хромосоме клетки рядом с tгр+-генами. При индуцировании лизогенных кле­ток (УФ) фаг выходит из интегрированного состояния, захваты­вая trp-гены. При инфицировании новых клеток вирион фага пе­редает эти гены, осуществляя специфическую трансдукцию. В ка­честве реципиента взят ауксотрофный по триптофану штамм, ко­торый не способен синтезировать этой аминокислоты и нуждает­ся в ее присутствии в питательной среде для своего роста.



При постановке опыта лизогенный штамм донора обраба­тывают УФ лучами, центрифугируют со скоростью 103 об./мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость (содержащую инду­цированный трансдуцирующий фаг) используют в дальнейшей работе. Центрифугат не содержит клетки донора.

К 3 мл суточной бульонной культуры реципиента (густота 5х108 м.т./мл) добавьте 1 мл полученного центрифугата. Смесь помещают в термостат на 30-60 минут, после чего делают высев 0,1 мл на минимальную среду, не содержащую триптофана.

Контроли:

1) посев донора на минимальную среду;

2) посев реципиента на минимальную среду;

3) посев реципиента на среду с триптофаном;

4) посев центрифугата на минимальную среду;

5) посев центрифугата на среду с триптофаном.

Все посевы помещают в термостат. Учет результатов через 18-24 часа. Зарисуйте результаты эксперимента. Чьи колонии выросли на минимальной среде из трансдуцирующей смеси в опыте? Почему? Рассчитайте частоту трансдукции триптофанового признака по известной Вам формуле.

 

4. Опыт по трансформации: передача капсульного признака (caps+).

Донор: изолированная ДНК штамма К. pneumoniae (caps+)



Реципиент: штамм Е. coli caps-

Рекомбинант: ? (назовите и укажите генетическую характе­ристику по указанному признаку)

В опыте произведен посев штамма реципиента на среду Эндо с добавлением ДНК донора.

Контроли:

1) посев штамма донора на среду Эндо;

2) посев штамма реципиента на среду Эндо.

Посевы помещены в термостат на 24 часа. Учтите результа­ты. Обратите внимание, что колонии донорского штамма на Эн­до лактозопозитивны (красного цвета), слизистой консистенции, а колонии реципиента лактозопозитивны, обычной мягкой кон­систенции. Оцените характер роста на среде Эндо с добавлением ДНК донора. Найдите колонии рекомбинанта. Как они выгля­дят? Зарисуйте схему постановки опыта. Опишите колонии до­нора, реципиента и рекомбинанта. Промикроскопируйте гото­вые мазки из колоний донора, реципиента, рекомбинанта, окра­шенные по методу Бурри-Гинса на выявление капсулы. Зарисуй­те результаты.

 


Дата добавления: 2015-05-08; просмотров: 11; Нарушение авторских прав





lektsii.com - Лекции.Ком - 2014-2020 год. (0.008 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав
Главная страница Случайная страница Контакты