КАТЕГОРИИ:
АстрономияБиологияГеографияДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Определение фитотоксичности
Определение фитотоксичности было основано на методике оценки влияние водных экстрактов на интенсивность прорастания семян Raphanus sativus (редис сорт «Красный круглый с белым кончиком») (Теория и методы экологического нормирования, 2006).
Посуда и материалы:
-Чашки Петри диаметром 10 см;
-Диски фильтровальной бумаги диаметром 9 см – по одному на каждую чашку Петри;
Вся посуда стерилизуется в автоклаве при 1 атм в течение 20 мин.
Процедура биотестирования:
15 штук семян редиса укладывали равномерно на фильтровальную бумагу в чашку Петри. Предварительно в чашки Петри раскладывали диски фильтровальной бумаги и наливали по 5 мл исследуемых вытяжек. В качестве контроля используется водопроводная вода. Уровень жидкости в чашках должен быть ниже поверхности семян. Чашки покрывали и помещали в термостат при температуре 200С.
Через 72 часа измеряли длину корней проростков. У непроросших семян длину корней принимали равной нулю.
Уровень фитотоксичности (Т, %): рассчитывается по следующей формуле
Т= 
100.
где 
контр - среднее арифметическое длины проростков в контроле;
оп - среднее арифметическое длины проростков в опыте.
2.7 Биотестирование с использованием Paramecium caudatum
Методика основана на определении смертности парамеций (Paramecium caudatum) при воздействии токсических веществ, присутствующих в исследуемой пробе, по сравнению с контролем (ФР.1.39.2003.00923, Учебное пособие по общему курсу “Экологический мониторинг”, 2007).
Острое токсическое действие исследуемой пробы на парамециях определяется по их смертности (летальности) за определенный период экспозиции. Критерием острой токсичности является гибель или обездвиживание в тестируемой воде 50% и более особей в течение 1 ч по сравнению с контролем.
При определении острой токсичности устанавливают:
-среднюю летальную концентрацию отдельных веществ (кратность разбавления пробы), вызывающую гибель 50% тест-объектов за 1 часовую экспозицию.
-безвредную (не вызывающую эффекта острой токсичности) концентрацию отдельных веществ (кратность разбавления пробы), вызывающую гибель не более 10% за 1 часовую экспозицию.
Процедура биотестирования:
Для биотестирования используют микроаквариумы с лунками, которые помещают на предметный столик микроскопа МБС-9, МБС-10. Одну из лунок заполняют культурой инфузорий с помощью капиллярной пипетки. В свободные лунки капиллярной пипеткой рассаживают по 10 особей в каждую лунку, при посадке тест-объекта количество культуральной жидкости в лунке не должно превышать 0,02 мл. Три лунки используют в качестве контрольных. После посадки инфузорий в каждую лунку наливают по 0,3 мл культивационной воды (контроль) и тестируемой пробы в соответствующих концентрациях.
Для разбавления используют водопроводную дехлорированную воду.
После посадки инфузорий микроаквариум помещают в чашку Петри, на дно которой кладут фильтровальную бумагу, смоченную водой, чтобы не испарялось содержимое лунок, и выдерживают в течение 1 часа при температуре 22-24°С. По истечении этого времени под микроскопом подсчитывают количество выживших особей. Выжившими считаются инфузории, которые свободно перемещаются в толще воды, обездвиженных особей относят к погибшим. Результаты заносят в таблицу.
Время от начала опыта — 1 ч.
Смертность инфузорий в процентах к контролю (А) рассчитывается по формуле:
A =xк-х/xк· 100%,
где хк — среднее арифметическое число особей инфузорий выживших в контроле;
x — среднее арифметическое число инфузорий, выживших в опыте.
Результаты наносятся на график.
Из графика находят ЛК50 — концентрацию вещества, вызывающую гибель 50% инфузорий.
А≤10%,тестируемая проба не оказывает острое токсическое действие (безвредное разбавление).
А≥50%, тестируемая проба оказывает острое токсическое действие (средне-летальная кратность разбавления).
Дата добавления: 2015-08-05; просмотров: 270; Мы поможем в написании вашей работы!; Нарушение авторских прав |