Правила взятия и доставки биопсийного материала

Для бактериологического исследования необходимо взятие не менее двух биопсийных образцов из тела и антрального отдела желудка. В целях максимального исключения ошибки проводимого исследования (гипо- или гипердиагностика инфекции) оптимальным считается взятие 3-х биопсийных образцов. Обычно фрагменты слизистой оболочки желудка берутся из антрального отдела желудка по вершинам воображаемого равностороннего треугольника с привратником в центре, на расстоянии 2-4 см от него; из тела желудка по большой и малой кривизне и из свода желудка.

Обязательные условия при эндоскопии:

- во время эндоскопии необходимо уделить особое внимание малой кривизне желудка и луковице двенадцатиперстной кишки, так как при язве в луковице может быть выраженный отек, а также возможен спазм мускулатуры желудка и двенадцатиперстной кишки, при котором достаточно сложно увидеть язву;

- взятие биопсии требует особого внимания. Некоторые язвы иногда кровоточат и при неосторожном взятии биопсии это может привести к кровотечению. Изъязвления после биопсии успешно и достаточно быстро заживают. При биопсии, взятой из здоровой слизистой, риск кровотечения невелик. Если после биопсии начинается кровотечение, пациенту необходимо промыть место кровотечения холодной водой. В случае, если это не помогло, необходимо тампонировать место кровотечения биопсийными щипцами на 2-3 мин. Также для остановки кровотечения можно сделать инъекцию 1 мл 0,01% адреналина в ближайший к кровотечению участок.

Количество биопсийных образцов для бактериологического исследования

Поскольку Н.pylori – микроаэрофил и очень чувствителен к условиям внешней среды (при избытке кислорода быстро погибает), необходимо строго соблюдать правила транспортировки биопсийного материала набактериологическое исследование для того,чтобы сохранить этот микроорганизм в жизнеспособном состоянии.Лучшей, в настоящее время, для транспортировки биопсийных образцов признана Pylori-среда (BioMerioux, Фрынция), которая способна стабильно поддерживать жизнеспособность Н.pylori в биопсийном материале до 2-х суток. Чистая культура Н.pylori в этой среде может сохранять свою жизнеспособность в течение 4-5 дней. Если биопсийные образцы

замораживаются при –70⁰С, то посев биопсийного материала можно провести в течение месяца. Однако, глубокое замораживание необходимо проводить только в том случае, когда проведение бактериологического исследования по каким-то веским причинам невозможно провести в течение 24-48 часов.

Первичный посев биопсийного материала проводят на2питательные среды–селективную и неселективную.Для культивирования и выделения Н.pylori разработано большое количество неселективных питательных сред с 5-10% содержанием крови лошади, барана или кролика на основе агара: Muller-Hinton, Brucella, Columbia или Wilkins-Chalgren. Поскольку природная экологическая ниша Н.pylori не является стерильной, а иногда бывает нельзя исключить

«Helicobacter pylori - инфекция» 8

возможность контаминации биопсийного образца во время его взятия и транспортировки, то для выделения Н.pylori из биоптатов было предложено использовать специальные селективные питательные среды, содержащие антибактериальные и противогрибковые препараты, способные подавлять рост сопутствующей или контаминационной микрофлоры.

Выбор сред всегда зависит от возможностей микробиологической лаборатории. Среды должны быть свежеприготовленными. Готовые среды хранят при температуре +4⁰С-+6⁰С не более 2-х недель.

Среды, испоьзуемые для транспортировки биопсийного материала

Перед посевом биопсийного материала на питательные среды его помещают в 0,5 мл свежеприготовленного физиологического раствора и гомогенизируют при помощи механического гомогенизатора в течение 1 мин (электрическим гомогенизатором при 10 000 об/мин в течение 10-20 с). Затем по две капли гомогенизированного раствора помещают на поверхность чашек с селективной и неселективной питательной средой. Посев производят сплошным газоном с помощью стеклянного шпателя или бактериологической петли.

Дезинфекция гомогенизатора проводится в 2% глутаральдегиде или 96% спирте.

Если лаборатория не имеет оборудования для гомогенизации биопсийного материала, то его непосредственно помещают на чашку Петри с селективной питательной средой и растирают по ее поверхности с помощью петли или стеклянного шпателя. В этом случае выделение чистой культуры Н.pylori менее успешно, так как бактерии бывает сложно отделить от слизистой и сама по себе селективная среда может опосредованно, за счет антибиотиков входящих в ее состав, препятствовать росту Н.pylori.

При культивировании Н.pylori могут возникнуть определенные трудности,которые связаны с созданиеммикроаэрофильных условий . Необходимую для культивирования атмосферу создают заполнением анаэростатов газовой смесью с помощью коммерческих газогенерирующих пакетов, например производства BioMerioux, Фрынция. Газогенерирующие пакеты удобны, прежде всего, тем, что используемая в них вода создает в микроанаэростате необходимую для роста Н.pylori влажность. В том случае, если микроанаэростат заполняется газовой смесью извне, внутрь анаэростата необходимо положить фильтровальную бумагу, смоченную водой.