Иммуногистохимический метод

Биопсийный материал, фиксированный в формалине и залитый в парафин, обрабатывается моноклональными антителами против Н.pylori. Готовые к применению коммерческие наборы с моноклональными антителами работают при разведении 1:200000 и избирательно окрашивают только Н.pylori. Этот метод хорошо зарекомендовал себя при исключительно низкой степени обсемененности СОЖ Н.pylori, когда морфологический метод и уреазный тест дают ложноотрицательные или сомнительные результаты. Он также используется для выявления мофологически измененных (кокковых форм) Н.pylori.

Быстрый уреазный тест(оценка местной уреазной активности)

В основу определения уровня желудочной уреазной активности положен следующий принцип: уреаза катализирует быстрый гидролиз мочевины, находящейся в содержимом желудка. В результате реакции образуется аммиак и углекислый газ. рН среды сдвигается в щелочную сторону и это изменение можно зафиксировать с помощью индикатора. Быстрота изменения окраски индикатора зависит от уреазной активности, которая, в свою очередь, зависит от количества бактерий. В некоторых случаях уреазный тест становится положительным через несколько минут. При

«Helicobacter pylori - инфекция» 10

малом количестве бактерий изменение окраски в уреазном тесте может произойти через несколько часов, а иногда возможен и ложноотрицательный результат.

При проведении уреазного теста нужно учитывать и тот факт, что он может быть положительным у лиц, желудок которых колонизирован H.heilmanii, имеющим близкое сродство с Н.pylori.

В настоящее время разработано большое количество промышленно изготовленных уреазных тестов, среди которых наиболее распространен CLO-тест (Австралия). Коммерческий CLO-тест представляет собой гелеобразную таблетку, содержащую мочевину, феноловый красный (индикатор рН) и бактериостатический агент. Биоптат кладут на поверхность таблетки и при наличии уреазы индикатор изменяет ее окраску от желтой до малиновой. Через 20 минут этот тест положителен в 75% случаев, а через 24 часа в 95% случаев у больных с подтвержденным бактериологически хеликобактериозом.

Время появления малинового тона косвенно указывает на количество микроорганизмов:

(+) - незначительная инфицированность (малиновое окрашивание к концу суток); (++) - умеренная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 2 часов);

(+++) - значительная инфицированность (малиновое окрашивание появляется в течение первого часа) (-) - отрицательный результат (малиновое окрашивание не наступает).

В России чаще всего используется уреазный тест,приготовленный,непосредственно в лаборатории.

Этот тест экономичен, надежен, прост в использовании.

Применяемые реагенты:

Метод приготовления:

Готовят по обычной рецептуре: 0,01М фосфатный буфер рН 6,5 разливают по флаконам, стерилизуют при +121⁰С 15 мин. К охлажденному буферу добавляют мочевину – 2 г, раствор фенолового красного и азид натрия (обладающий свойствами консерванта). Цвет реактива должен быть желто-розовым. При подкислении реактива его цвет меняется на соломенно-желтый, при подщелачивании – на малиновый. Приготовленный реактив должен быть соломенно-желтого

цвета и может длительно храниться в темной упаковке при температуре +2⁰С - +6⁰С.

Процедура выполнения теста (с 2% мочевиной):

1. Поместить 2 капли реагента в пробирки типа эппендорф.

2. Поместить биопсийный материал в первую пробирку, вторая пробирка используется в качестве контрольной.

3. Плотно закрыть пробирки.

4. Записать время начала выполнения теста.

5. Микропробирки инкубируют при температуре +37⁰С.

6. Учитывать результат через 20 мин, 1 ч, 3 ч, 24ч.

При проведении контроля лечения возможно увеличение интервалов времени изменения цвета реактива или получение ложноотрицательных результатов, поэтому тест в данном случае считается неспецифичным.

Учет результатов и показатели изменения времени окраски реагента через определенные промежутки времени