Фотография электрофореза в агарозном геле

k- 1 2 3 4 5 k+

Набор «Хеликопол» НПФ «Литех» (К-) - отрицательный котрольный образец, (К+) - положительный контрольный образец, (1-5) – клинические пробы.

Альтернативой электрофоретическим методам детекции ПЦР-амплифицированной ДНК являются методы ДНК-гибридизации.В ходе такого способа детекции амплифицированная ДНК гибридизуется с олигонуклеотидным зондом,специфичным к внутренней последовательности анализируемого фрагмента. Образовавшийся гибрид автоматически регистрируется флуоресцентным или фотометрическим ридером. Таким образом, при гибридизационном способе детекции ДНК специфичность реакции амплификации подтверждается несколько раз. Сначала в ходе самого этапа амплификации (отжига праймеров) и вторично при гибридизации получившегося продукта со специфичным зондом.

Гибридизационный способ детекции был предложен фирмой Хоффман-ла Рош и используется в наборе для ПЦР-диагностики AMPLICOR Chlamydia trachomatis. Из отечественных фирм- производителей гибридизационная схема детекции продуктов амплификации впервые была предложена НПФ «Литех» в технологической схеме «ПлаТАн» в 2000 году. В настоящее время для такого способа детекции адаптировано большинство ПЦР наборов производства НПФ «Литех». При использовании данной технологии гибридизация осуществляется в специальных микропланшетах с применением флуоресцентных олигонуклеотидных зондов. Регистрация гибридизации осуществляется прибором – микропланшетным флуориметром Fluoroskan Ascent (Лабсистемс, Финляндия).

«Helicobacter pylori - инфекция» 13

Калькуляция результата производится автоматически специально разработанной компьютерной программой и выводится на экран, как в символьном («-»; «+»), так и в цифровом виде (Рисунок 2).

Цитологический методиспользуется только в России.Метод основан на выявлении бактериальных тел в мазках-отпечатках биоптатов СОЖ. Мазки окрашиваются по методу Романовского-Гимзы. Бактерии располагаются в слизи, имеют спиралевидную или S-образную формы. Помимо Н.pylori выявляется также клеточная инфильтрация, представленная лимфоцитами, нейтрофилами, плазматическими клетками и эозинофилами. По преобладанию тех или иных клеток можно приблизительно судить об активности и выраженности воспаления. Цитологическое исследование позволяет выявить наличие пролиферативных процессов, метаплазии и дисплазии, а также оценить степень их выраженности. Можно обнаружить и неопластические изменения, но этот метод недостаточно информирует о структурных изменениях СОЖ. В странах дальнего зарубежья этот метод не используется из-за его очень низкой чувствительности, которая составляет в среднем 18-20%. Н.pylori в цитологических препаратах можно выявить только в случае максимального обсеменения слизистой оболочки.

Выдача результата ПЦР-анализа ДНК НР при использовании гибридизационной технологии «ПлаТАн» (НПФ «Литех»)