Количественный анализ

Количественное определение барбитуратов, изолированных из биологического материала, проводят методом спектрофотометрии. Барбитураты обладают специфической абсорбцией в ультрафиолетовой области спектра, при pH 10 и 13 и отсутствии таковой при pH 2. Максимум поглощения – 240 нм (при pH 10), 260нм (при pH 13) (рис. 13).

Предварительно необходимо определить наличие определенного барбитурата методом ТСХ.

Приготовление стандартного раствора барбитуратов. Точную навеску барбитурата (50 мг) помещают в мерную колбу на 1000 мл и растворяют ее в 100 мл фосфатного буфера (pH 7,4) при осторожном перемешивании, затем объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой. Концентрация барбитурата составляет 50 мкг/мл.

Рис. 13. Спектры поглощения барбитуратов в зависимости от pH раствора

Построение калибровочного графика. В ряд мерных колб на 50 мл вносят соответственно 2, 5, 10, 15, 20 мл стандартного раствора барбитурата и доводят до метки боратным буфером (pH 10,0). Измеряют оптическую плотность растворов при λ = 240 нм в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. Раствором сравнения служит боратный буфер. По средним значениям из 3 определений строят калибровочный график (рис. 13). Полученные данные заносят в таблицу:

Таблица 3. Данные для построения калибровочного графика.

Рис. 14. Калибровочный график.

Количественное определение барбитуратов, изолированных из биологического материала, проводят следующим образом. 5 мл хлороформного извлечения из кислого раствора помещают в делительную воронку и экстрагируют 3 порциями боратного буфера (15, 10 и 10 мл). Объединенные водные извлечения собирают в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки боратным буфером. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при λ = 240 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см по сравнению с боратным буфером. По калибровочному графику находят содержание данного барбитурата и рассчитывают концентрацию его в исходном биологическом материале по формуле:

m (мкг) = C (мкг/мл) · 50 мл

План занятия

ВОПРОСЫ для контроля