Ход анализа

Точную навеску образца (примерно 0,5 г или 1÷5 мл суспензии) помещают в круглодонную специальную колбу (колбу Къельдаля), добавляют на кончике шпателя небольшое количество селенового катализатора, а затем добавляют 5 мл концентрированной серной кислоты, на специальной подставке в наклонном положении помещают на электрическую плитку для сжигания пробы. При полном обесцвечивании раствора сжигание заканчивают, колбу остужают, а ее содержимое количественно переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой. После тщательного перемешивания приступают к отгонке аммиака на аппарате Къельдаля. Одновременно со сжиганием пробы проводится определение концентрации абсолютно сухих веществ (АСВ) в пробе.

Непосредственно перед началом перегонки в приемник (коническую колбу вместимостью 50 мл) вносят 10 мл реактива Конвея. В перегонную колбу вливают 10 мл пробы, несколько капель смешанного индикатора. Как только вся проба сольется внутрь перегонной колбы, в нее добавляют 3÷4 мл 40%-го раствора гидроксида натрия до появления зеленоватого окрашивания индикатора, после чего сразу начинается перегонка. Перегонку прекращают, когда рН на выходе из перегонной колбы становится равным 6÷7 (по индикаторной бумаге).

Содержимое приемной колбы титруется 0,05 н раствором серной кислоты при непрерывном перемешивании.

Содержание общего азота рассчитывают по формуле:

W_N = ,

где W_N – содержание азота в пробе;

V – объем серной кислоты, израсходованной на титрование, мл;

0,05 – концентрация титранта, мг-экв/мл;

14 – количество азота, мг, которое связывает 1 мг-экв серной кислоты;

100 – объем раствора в мерной колбе, мл;

10 – количество раствора, взятого для отгона аммиака, мл;

m – навеска материала, мг.

Количество сырого протеина рассчитывают по формуле:

W_{протеин} = N∙6,25,

где 6,25 – эмпирический коэффициент.

Для определения белкового и небелкового азота поступают следующим образом. Навеску 10÷30 мг заливают 5 мл 7% ТХУ (трихлоруксусная кислота) на холоду. Центрифужные пробирки оставляют на ночь в холодильнике, а затем центрифугируют. Надосадочную жидкость переносят в одну колбу Къельдаля, а осадок с небольшой порцией дистиллированной воды – в другую (белковый азот – в осадке, небелковый – в надосадочной жидкости), далее проводят сжигание и отгонку азота по методу Къельдаля.