Ход исследования

A)Скрининговая окраска по Романовскому-Гимзе

• Высушенный мазок фиксируют в смеси Никифорова в течение 10—15 мин.

• Опустить мазок в сульфатно-уксусный реагент на 10 мин.

• Промывать проточной водой в течение 5 мин.

• Высушить мазок на воздухе.

• Окрашивать 10 %-ной краской Романовского-Гимзы в течение 30 мин.
Результат: цитоплазма трофозоитов голубоватая, ядро - розовое, внутрицистные тельца имеют фиолетовое ядро.

Б) Окончательная или специфическая окраска толуидиновым синим

• Высушенный мазок фиксируют в 10 %-ном растворе формалина.

• Промыть дистиллированной водой.

• Опустить мазок в сульфатно-уксусный реагент на 5 мин.

• Реагент перемешать стеклянной палочкой.

• Оставить мазок в сульфатно-уксусном реагенте еще на 10 мин.

• Промыть проточной водой.

• Высушить мазок на воздухе.

• Окрашивать 0,15 %-ным толуидиновым синим в течение 3 мин.

• Промыть проточной водой.

• Высушить мазок на воздухе.

• Докрашивать в 0,25 %-ном растворе водного метанилового желтого в течение 2 мин.

• Промыть водой.

Результат: четко дифференцируется стенка пневмоцист, но не дает представления о клеточном содержимом; цисты сине-фиолетовые, тканевые элементы и фон - зелено-желтые.

B) Окончательная или специфическая окраска по Гомори-Грохоту

• Высушенные мазки фиксируют в 10 %-ном растворе формалина в течение 5—10 мин.

• Промыть дистиллированной водой.

• Быстро подогреть раствор хромовой кислоты в стакане до 65 ° С.

• В нагретый раствор быстро погрузить мазки на 1 мин.

• Промыть дистиллированной водой.

• Опустить мазки в 1 %-ный раствор метабисульфита калия на 1 мин.

• Приготовить раствор: 25 мл рабочего раствора серебра + 25 мл дистиллированной воды +2 мл 5 %-ного водного тетрабората натрия + 15 мл диметилсульфоксида.

• Опустить мазки в приготовленный раствор.

• Подогреть до 90—95 °С, пока мазки не станут темно-коричневыми, а раствор светло-серым.

• Прополоскать мазки в трех сменах дистиллированной воды.

• Опустить мазки в 0,2 %-ный водный раствор тиосульфата соды на 1 мин.

• Промыть дистиллированной водой.

• Окрашивать лихтгрюном в течение 5 мин.

• Промыть дистиллированной водой.

Результат: цисты светло- или темно-коричневые (цвет зависит от толщины мазка), округлой или чашеобразной формы, окружающий фон и тканевые элементы зелено-желтые.

Г) Окраска акридином оранжевым.

• Высушенные мазки фиксируют в абсолютном метаноле в течение 2 мин.

• Окрасить рабочим раствором акридина оранжевого 10 мин.

• Промыть дистиллированной водой.

• Высушить окрашенные мазки на воздухе.

• Микроскопировать под масляной иммерсией при увеличении: объектив х 90 или
х 100, окуляр х 7 или х 10.