В) Обогащение методом седиментации

• Поместить в пробирку 0,5—1 г фекалий

• Залить 10—12 мл изотонического раствора хлорида натрия

• Перемешать содержимое пробирки до образования однородной суспензии

• Процедить суспензию через двойной слой марли в другую пробирку

• Центрифугировать

• Слить надосадочную жидкость

• Повторно залить осадок изотоническим раствором хлорида натрия

• Центрифугировать

• Слить надосадочную жидкость

• Перенести осадок пипеткой на предметное стекло

• Приготовить из осадка мазок

Ход исследования

Высушить мазки на воздухе (мазки, приготовленные одним из способов, описанных

в п. п. А, Б, В).

• Фиксировать мазки в смеси Никифорова в течение 10—15 мин.

• Высушить на воздухе.

• Фиксированные и высушенные мазки быстро провести 3—5 раз над пламенем
горелки.

• Поместить мазок в рабочий раствор карбол-фуксина на 5—10 мин.

• Промыть мазок водопроводной водой.

• Обесцветить мазок 7 %-ным раствором серной кислоты в течение 20—60 с.

• Промыть в воде.

• Подкрасить в течение 5 мин 5 %-ным раствором малахитовой зелени.

• Промыть в воде.

• Высушить на воздухе.

• Микроскопировать при увеличении: окуляр х 10, объектив х 90 или х 100 с масляной иммерсией.

Эффективность метода

• Метод окраски фиксированных мазков по Цилю-Нильсену считается одним из наиболее надежных для выявления ооцист криптоспоридий.

Результат: ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки ярко-красного цвета и имеют вид округлых образований диаметром около 5 мкм. Оболочка ооцист окрашивается фуксином неравномерно. Сопутствующая микрофлора окрашивается в зеленые цвета.

Применение метода

• Применяется для диагностики криптоспоридиоза.

Примечание.Для окрашивания фиксированных мазков можно применять и другие красители, например: Азур-эозином по Романовскому-Гимзе окрашивать от 10 до 30—45 мин в 10%-ном растворе красителя при этом ооцисты не окрашиваются или слабо окрашиваются и имеют вид округлых образований, внутри ооцист (по периферии) могут быть в виде бледно-голубых удлиненных и слегка изогнутых телец (спорозоиты) с красноватыми гранулами внутри.

Количественные копроовоскопические методы

Количественными методами определяют число яиц гельминтов в 1 г или 1 мл фекалий. Данные методы дают ориентировочное представление об интенсивности инвазии, позволяют судить об эффективности лечения гельминтозов при частичном паразитологическом излечении.

Метод толстого мазка под целлофаном по Като-Кац (количественная модификация метода Като и Миура)