Задание к лабораторной работе

1 Провести количественный учет микрофлоры исследуемого объекта и воздуха.

Количественный учет.

Для определения количества микоорганизмов в 1 г исследуемого объекта (КОЕ/г) используются формулы и рекомендации, представленные в работе 9.

При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста называется сплошным или газонным. В таком случае для осуществления количественного учета необходимо производить посев более разбавленной суспензии микроорганизмов.

2 Зарисовать чашки с выросшими колониями. Описать культуральные признаки колоний.

Культуральные признаки.

Выяснение систематического положения микроорганизмов является необходимым условием для проведения с ними дальнейшей работы. Однако определение видовой принадлежности у многих микробов представляет собой достаточно трудную исследовательскую задачу, которая требует определённого навыка. Она включает изучение ряда особенностей микроорганизмов: морфологии клеток, характера роста культуры на различных средах, отношения к температуре, кислотности среды, кислороду. Кроме того, для определения вида необходимо проведение значительного количества сложных биохимических анализов. Поэтому в данной работе задача определения микроорганизмов до вида не ставится.

Рост микроорганизмов на плотных питательных средах. Предварительно на плотных средах выращиваются накопительные культуры.

Наиболее существенной особенностью роста на плотной питательной среде является характер роста колонии. Различают поверхностные, глубинные и донные колонии, в зависимости от того, где они развивались. Обычно изучают и описывают колонии, выросшие на поверхности среды, так как именно эти колонии отличаются большим разнообразием. При описании колонии необходимо указывать возраст культуры, состав среды, температуру культивирования.

Описание поверхностных колоний проводят по следующей схеме:

- форма клони – округлая, ризоидная, неправильная, эллипсовидная, амебовидная, складчатая, концентрическая и т.д.;

- поверхность колонии – гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая и т.д.;

- цвет колонии – бесцветная (грязно-белые колонии относятся к бесцветным колониям) или пигментированная – желтая, золотистая, сиреневая, красная, черная и т.д.;

- профиль колонии – плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и т.д. (рисунок 22);

а – изогнутый, б – кратерообразный, в – бугристый, г – врастающий в субстрат, д – плоский, е – выпуклый, ж - каплевидный, з- конусовидный.

Рисунок 22 - Профиль колонии

- край колонии – ровный, волнистый, лопастной, ризоидный и т.д. определяют при малом увеличении микроскопа х8;

- размер колонии (диаметр) определяют с помощью обычной линейки. Точечными или росинчатыми называют колонии менее 1 мм в диаметре, но видимые невооруженным глазом; мелкие колонии имеют 1-2 мм в диаметре; средние, крупные;

- структура колонии – однородная, мелко или крупнозенистая, струйчвтая и т.д. определяют при малом увеличении микроскопа х8 (рисунок 23);

- консистенция колонии – может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, слизистой (прилипает к петле), тягучей, волокнистой (снимается целиком), хрупкой (легко ломается при прикосновении петли);

- блеск поверхности – блестящая, матовая, гладкая, тусклая и т.д.;

- прозрачность колонии – прозрачная, непрозрачная, полупрозрачная, мучнистая и др.

3 Приготовить препараты, описать морфологические признаки и провести идентификацию (частичную) микроорганизмов. Зарисовать микроскопические картинки.

При изучении морфологии клеток (бактерии на фиксированных препаратах, окраска по Граму, объективы с масляной иммерсией, грибы, дрожжи – на препарате «раздавленная капля») определяют форму клеток, их взаимное расположение, наличие спор, капсул, почкующихся клеток и др. при исследовании грибных культур определяют род гриба.

Зарисовать все микроскопические картинки.

а – круглая; б – круглая с фестончатым краем; в – круглая с валиком по краю; г, д – ризоидные; е – с ризоидным краем; ж – амебовидная; з – нитевидная; и – складчатая; к – неправильная; л – концентрическая; м – сложная.

Рисунок 23 - Форма колоний

4 Сделать выводы о количественном и качественном составе микрофлоры исследуемых объектов.

При обобщении полученных результатов сравнить количественный и качественный состав микрофлоры исследуемых объектов с литературными данными и нормативами. Указать преимущественно содержащиеся формы микроорганизмов. Указать возможные причины повышения норм и способы снижения микробиологической обсемененности исследуемых объектов.

5 Произвести выделение чистой культуры микроорганизмов.

Основным методом выделения чистой культуры микроорганизмов является метод Коха с помощью твердых питательных сред.

В данной работе, выбирают хорошо изолированную колонию с морфологически однородными клетками. Пересевают культуру из колонии в пробирку со скошенной плотной питательной средой (косяк).

Посев проводят следующим образом:

- зажигают спиртовку;

- зажимают пробирку средним пальцем левой руки (скошенная поверхность агара должна быть обращенной вверх);

- вынимают пробку, прижимая её мизинцем и безымянным пальцем правой руки к ладони, не касаясь той части пробки, которая входить внутрь пробирки;

- края открытой пробирки обжигают в пламени спиртовки;

- берут иглу в правую руку, держат как писчее перо;

- иглу прокаливают в пламени спиртовки;

- приоткрывают чашку Петри левой рукой, берут иглой материал из колонии и закрывают крышку. Чтобы не повредить клетки, иглу вначале охлаждают о среду, свободную от микробов;

- быстро делают посев скользящим движением по скошенной поверхности среды непрерывным зигзагообразным штрихом от одной стенки пробирки к другой снизу вверх;

- иглу обжигают в пламени спиртовки и ставят в штатив;

- пробирку закрывают, предварительно профламбировав их края и ту часть пробки, которая входит в пробирку;

Вопросы к защите лабораторной работы

1 Какие условия нужны для культивирования микроорганизмов?

2 Какие признаки колоний учитывают при изучении культуральных свойств бактерии?

3 Что представляют собой смешанная и чистая культуры микроорганизмов?

4 С какой целью микроорганизмы выделяют в виде чистых культур?