Культуральные признаки дрожжей

Определение культуральных признаков производят на плотных и жидких средах. При росте на плотных средах описывают гигантской колонии сусло с желатиной (20%) или сусло-агар стерилизуют в небольших конических колбочках слоем толщиной 2-3 см. В центр поверхности застывшей среды уколом иглы производят посев маленькой капли молодой культуры. Выращивают колонии в течение 30 сут при комнатной температуре. Для предупреждения высыхания среды колбочки обвязывают полиэтиленовыми колпачками. Дрожжи разных видов образуют гигантские колонии, отличающиеся по размерам, форме, цвету, структуре поверхности, характеру края. Обращают внимание также на разжижение желатины.

Характер роста дрожжа в жидких средах определяют в колбочках или пробирках с солодовым суслом концентрацией 15% CВ или глюкозопептонной средой с дрожжевым экстрактом. Время инкубации - 4 нед при комнатной температуре. Дрожжи вызывают помутнение, осадок, образование кольца пленки. Дрожжи-аскомицеты образуют осадок. Рост в виде пленки характерен для дрожжей, образующих мицелиальные структуры (Candida, Trichosporon и др.).

Для дрожжей с окислительным типом энергетического метаболизма характерно раннее, через 1-2 дня, образование тонкой пленки, всползающей по стенкам пробирки.

ХОД РАБОТЫ:

Оборудование и материалы:1)дрожжи, 2) пробирки, 3)крахмал, 4) глюкоза, 5) пипетка, 6) водяная баня, 7) термометр, 8) предметное и покровное стекла, 9) бактериологическая петля, 10) микроскоп, 11) раствор Люголя

Опыт №1:Наблюдение за развитием культуры дрожжей.

1. Взять три пробирки и в каждую поместить по 100 мг сухих дрожжей.
2. Во все три пробирки добавить по одному мл воды.
3. Во вторую пробирку добавить 20 мг крахмала, а в третью - несколько кристалликов глюкозы.
4. Все три пробирки поместить в водяную баню на 38⁰С и наблюдать за появлением пузырьков /начало брожение/, отмечая время появления первых пузырьков. Запишите, через сколько минут после начала наблюдения появления первые пузырьки в пробирках, объясните различия.

Опыт №2: Приготовление прижизненного препарата дрожжей.

Каплю культуры дрожжей берут приблизительно через десять минут после начало брожения. Каплю нанести на предметное стекло петлей, накрыть покровным стеклом и рассмотреть при малом увеличении. В поле зрения микроскопа видны округлые и вытянутые клетки, среди которых встречаются почкующиеся. Если число клеток в поле зрения невелико, подсчитайте их общее количество и число почкующихся клеток. Проследите за препаратом в течение 5-10 минут. Постарайтесь заметить процесс почкования и возможное увеличение количества почкующихся клеток.

Зарисуйте дрожжевую клетку, отметив ядро. Зарисуйте почкующуюся клетку.

Опыт №3:Определение гликогена в дрожжевых клетках.

Гликоген - запасное питательное вещество, появляющееся в дрожжах к моменту сбраживания 2/3 сахаров сусла.

Для определения гликогена на предметное стекло наносят каплю нефильтрованных дрожжей 2-3 капли 0,5%-ного раствора йода. Капли смешивают, покрывают покровным стеклом, удаляют излишек жидкости фильтровальной бумагой. Через 10 минут цитоплазма дрожжевых клеток окрашивается в светло-желтый цвет, гранулы гликогена - в красно-бурый. В нормальных дрожжах гликоген занимает от 1/3 до 2/3 клетки. Если гликогена меньше 1/4 объема клетки, его содержание считают недостаточным. Молодые дрожжи окрашиваются йодом в светло-желтый цвет. В перезревших или голодных клетках гликоген отсутствует или содержится в незначительном количестве в вакуолях.