Идентификация Helicobacter spp в желчных камнях у детей

В трех из семи исследованных камней 1, 4 и 5 были определены нуклеотидные последовательности фрагментов ДНК имеющие, высокую гомологию с последовательностями консервативного участка генов 16S рРНК H.pylori, H.nemestrinae и H.pametensis - 99%, 94%и87%,соответственно.Кроме того,последовательность фрагмента ДНКHelicobacter spp, верифицированная в камне 2 обнаруживала гомологию с последовательностями участка гена 16S рРНК H.muridarum и H.mustelae (89%) и в камне 3 с аналогичными последовательностями ДНК H.felis и H.muridarum с

(95%).

Таким образом, анализ нуклеотидной последовательности ДНК, выделенной из желчных камней, полученных от детей, инфицированных H.pylori, показал, что бактериальная флора желчных камней имеет смешанный характер. Бактериальная флора желчных камней, полученных от детей, инфицированных H.pylori, включала широкий спектр облигатных анаэробов (Bacteroides spp, Eubacterium spp, Porphyromonas spp, Prevotella spp), микроаэрофилов (Helicobacter spp, Campylobacter spp) и факультативных анаэробов (Pseudomonas spp, Klebsiella spp, Corynebacterium spp, Acinetobacter spp),а также некультивируемых протеобактерий.Никакого преобладающего вида бактерий взависимости от природы камней нами найдено не было (для всех бактерий р>0.1).

Виды бактерии рода Helicobacter, идентифицированные с помощью секвенирования в желчных камнях

«Helicobacter pylori - инфекция» 21

В ряде работ было показано, что у взрослых в камнях встречается преимущественно кишечная флора: E.coli (27%),

Рropionbacterial type ДНК(23%),а также Pseudomonos, Actinomycetes и ДНК бактерий,подобных Streptococcus pyogenes

(A. Lee, 1999; N. Stenby, 1976; X. Wu, 1998). Необходимо отметить, что у взрослых в холестериновых камнях была идентифицирована ДНК E.coli. Отсутствие E.coli в списке идентифицированных нами бактерий в желчных камнях у детей может быть связано с тем, что использованные последовательности праймеров (HPL и HPR) имели низкую гомологию с аналогичными участками последовательности консервативного фрагмента гена 16S рРНК E.coli (менее 65%). Как видно из данных, представленных в таблице, основная флора в желчных камнях у детей, страдающих гастритом, вызванным H.pylori, представлена Acinetobacter spp, Bacteroides spp, Helicobacter spp и Uncultured bacterium.

Таким образом, бактериальная флора желчных камней у детей резко отличается от бактериальной флоры взрослых.

В ряде работ было показано, что в ДНК смешанной бактериальной популяции желчных камней у взрослых может быть верифицирована ДНК H.pylori. Это по мнению авторов может указывать либо на то, что H.pylori является индигенной (необходимой) частью микрофлоры желчи, либо, что колонизация H.pylori в желчном протоке провоцирует образование желчных камней. Необходимо отметить, что в работе Monstein и соавторов, к сожалению, не приводятся данные по диагностике H.pylori в желудке больных. В нашей работе в желчных камнях у детей, страдающих гастритом,

ассоциированным с H.pylori, помимо ДНК H.pylori были обнаружены ДНК H.nemestrinae, H.pametensis, H.muridarum, H.mustelae и H.felis.

В результате проведенной нами работы было показано, что H.pylori встречается достаточно часто в желчных камнях у детей, инфицированных этим микроорганизмом, однако не во всех случаях. Кроме того, в 2 образцах из 7 были обнаружены ДНК H.muridarum (89-95%), H.mustelae (89%) H.felis (95%).

Учитывая высокую частоту встречаемости бактерий рода Helicobacter (18.8%) в камнях, можно утверждать, что Helicobacter spp, гораздо чаще являются причиной различных заболеваний желудочно-кишечного тракта игепатобилиарной системы, чем мы это можем себе представить.