Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных

Белки

Методические указания к лабораторному практикуму

по дисциплине ”Биохимия"

для студентов специальностей

49 01 01 “Технология хранения и переработки растительного сырья”,

49 01 02 “Технология хранения и переработки животного сырья”,

91 0101 “Производство продуктов и организация общественного питания”

Могилев 2002

УДК 557.1

Рассмотрены и утверждены

на заседании кафедры ХТВМС

Протокол № 12 от 2 июля 2002 г

Составители: доц. О.Н.Макасеева

асс. Л.М.Ткаченко

Рецензент: к.т.н., доц. Т.М.Тананайко

© Могилевский государственный университет продовольствия

Содержание

1 Основные требования техники безопасности при работе

в лабораториях и оказание первой помощи при несчастных случая…….…… .4

2 Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных работ…...… 5

3 Аминокислоты, пептиды и белки………………………………………………… .6

3.1 Протеиногенные аминокислоты… …………………………...……………… 6

3.2 Классификация аминокислот………………………………………………. ...9

3.3 Биологическое значение аминокислот……………………………………… 15

4 Цветные реакции на белки..……………………………………………………… 16

4.1 Биуретовая реакция…………………………………………………………...17

4.2 Нингидриновая реакция………………………………………………………18

4.3 Ксантопротеиновая реакция………………………………………………….19

4.4 Реакция Адамкевича…………………………………………………………..20

4.5 Реакция Фоля………………………………………………………………… 20

5 Физико-химические свойства белков…..………………...………………………21

5.1 Определение изоэлектрической точки белков……………………………....21

5.2 Высаливание белков сульфатом аммония…………………………………....23

5.3 Необратимое осаждение белков………………………………………………24

5.3.1 Осаждение белков органическими веществами…………………….......24

5.3.2 Денатурация белков при нагревании…………………………………….25

5.3.3 Осаждение белков концентрированными минеральными

кислотами………………………………………………………………………..26

5.3.4 Осаждение белков органическими кислотами………………………….26

5.3.5 Осаждение белков солями тяжелых металлов………………………….26

5.4 Разделение и очистка белков методом диализа…………………………….27

6 Методы определения азота в биологических объектах………………………….29

6.1 Количественное определение общего азота по методу Къельдаля.………..29

6.2 Определение различных форм азота в молоке и сыре………………………34

6.2.1 Метод определения общего количества азота в сыре………………....36

6.2.2 Метод определения общего количества растворимого азота…………37

6.2.3 Метод определения азотсодержащих небелковых соединений…..…...37

6.2.4 Метод определения аминного азота (пептиды, аминокислоты,

амиды, аммиак)…………………………………………………………………38

6.3 Определение белка в молоке по Лоури……………………………………….38

7 Определение влажности весовым методом……………………………………….40

7.1 Метод высушивания до постоянной массы…………………………………..41

7.2 Определение влажности ускоренным методом высушивания……………...41

7.3 Определение влажности экспрессным методом высушивания……………..42

8 Список используемых источников………………………………………………...42

Приложение А…………………………………………………………………………44

Приложение Б…………………………………………………………………………45

1 Основные требования техники безопасности при работе в лабораториях и оказание первой помощи при несчастных случаях

К выполнению лабораторных работ студенты допускаются только после прохождения инструктажа и обучения правилам техники безопасности и пожарной безопасности, проверки усвоения правил и росписи об этом в специальном журнале. Студенты несут дисциплинарную ответственность за несоблюдение общих и перечисленных ниже требований по технике безопасности и правил противопожарной безопасности. Основными из них являются следующие:

1. В химической лаборатории студент должен работать в халате.

2. При выполнении лабораторных работ необходимо руководствоваться имеющимися методическими пособиями. Отклонение от них возможно только по разрешению преподавателя.

3. Работая с химическими веществами, необходимо избегать попадания их на кожу. Запрещается принимать пищу в лаборатории.

4. Измерение объемов и набор концентрированных кислот и щелочей, а также других ядовитых жидкостей, разрешается только пипетками с резиновой грушей или мерными цилиндрами.

5. Запрещается наклонятся над сосудом, в котором нагревается жидкость.

6. Запрещается нагревать жидкости в герметично закрытой посуде.

7. Работа в вытяжном шкафу разрешается только при опущенном защитном экране.

8. При извлечении и переносе тиглей из муфельной печи (температура 600–700 ⁰С) следует пользоваться щипцами; тигли ставить только на огнестойкую подставку.

9. Использовать для работы реактивы только из склянок, имеющих соответствующие этикетки.

10. При переносе колб, стаканов с горячими жидкостями соблюдать особую осторожность и предусмотрительность.

11. Использовать только вымытую чистую посуду.

12. На рабочих столах запрещается выполнять работы с летучими веществами, растворителями (диэтиловый эфир, ацетон,спирт и др.) и концентрированными кислотами. Их необходимо выполнять в вытяжном шкафу, предварительно включив вентиляцию.

13. Остатки растворителей, концентрированных кислот и щелочей запрещается выливать в раковину. Растворители и концентрированные кислоты необходимо сливать раздельно в специальные, находящиеся в вытяжном шкафу емкости с плотно пригнанными пробками.

14. При выполнении работ, опасных с точки зрения самовозгорания и взрыва веществ, необходимо надевать защитный козырек из органического стекла или предохранительные очки.

15. Запрещается работать с летучими веществами (эфир, ацетон и др.) вблизи открытых электронагревательных устройств.

16. В случае воспламенения горючих жидкостей или других веществ, следует выключить электронагревательные приборы, убрать емкости с огнеопасными жидкостями и принять меры по ликвидации пожара.

17. При использовании буквенных сокращений в названиях смесей реактивов на этикетках склянок обязательно должны быть расшифровки составляющих компонентов смеси.

18. Перед включением центрифуги уравновесить противоположно размещаемые в гнездах ротора пробирки (стаканчики) и не открывать крышку центрифуги вплоть до ее полной остановки.

19. При работе с электроприборами убедиться в их заземлении и точно соблюдать правила эксплуатации.

20. По окончании работы в лаборатории нужно тщательно вымыть использованную посуду, убрать рабочее место, помыть руки с мылом, закрыть водопроводные краны, отключить электроэнергию.

21. При попадании кислот и щелочей на кожу немедленно промыть пораженный участок большим количеством воды в течение 10 мин. После этого при поражении кислотой место ожога промыть 5 %-ным раствором двууглекислого натрия, а при поражении едкими щелочами – 3 %-ным раствором уксусной кислоты. Глаза промывают 2 %-ным раствором борной кислоты. После оказания первой помощи обязательно обратиться к врачу.

22. При термических ожогах обожженное место промыть раствором перманганата калия.

23. В случае пореза рану следует обработать 3 %-ным раствором йода или

3 %-ным раствором перекиси водорода.

24. Запрещается принимать пищу в лаборатории.

Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных

Работ

Перед выполнением лабораторных работ студенты должны самостоятельно изучить теоретический материал соответствующих тем курса, используя рекомендуемую литературу, оформить первых два раздела отчета – "Теория" и "Методика". В разделе "Теория" приводятся основные положения, формулировка теорий и гипотез, уравнения химических реакций с написанием структурных формул, в разделе "Методика" – принципы и изложение метода.

К работе допускаются студенты, выполнившие эти требования и ознакомленные с оборудованием и приборами, знающие свойства используемых химических реагентов и образуемых продуктов реакции в ходе эксперимента.

Во время выполнения работы проводятся соответствующие наблюдения над объектами исследования. В лабораторном журнале отмечаются физические и физико-химические эффекты, сопровождающие химические взаимодействия, делаются расчеты, составляются таблицы и рисунки, формулируется результат, что определяет содержание третьего раздела отчета "Наблюдение и результаты". В последнем разделе студенты делают выводы на основании полученного результата и знания теории.

Записи выполняются четко и аккуратно, без сокращений, за исключением принятых, оставляются поля. До ухода с занятий отчет представляют на подпись преподавателю. Защита проводится в соответствии с графиком выполнения и защиты лабораторных работ.