Тема. Реакции иммунной сыворотки (серологические реакции).

Взаимодействие антигена с антителом проявляется в форме различных иммунологических, или серологических реакций. В связи с их высокой чувствительностью и специфичностью они нашли широкое диагностическое применение. Серологические реакции применяют с одинаковым успехом для двух целей. Во-первых, по известному антигену (диагностикуму) определяют в исследуемой сыворотке наличие и количественное содержание специфических к данному антигену антител. Последнее устанавливают путем титрования сыворотки. Титром иммунной сыворотки называют то ее максимальное разведение, которое еще дает положительную реакцию. Во-вторых, с помощью известного антитела, т.е. диагностической иммунной сыворотки, определяют наличие в исследуемом материале специфического антигена или осуществляют серологическую идентификацию выделенного возбудителя.

С диагностической целью используют следующие серологические реакции:

1. Реакция агглютинации в ее различных вариантах.

2. Реакция преципитации и ее различные модификации.

3. Реакции иммунофлуоресценции (РИФ) в прямом и непрямом

вариантах.

4. Реакции, протекающие с участием комплемента.

5. Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы.

6. Реакции нейтрализации биологической активности возбудителя.

Реакция агглютинации (РА)

Агглютинация (от лат. agglutinacio-склеивание)-склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Различают реакцию агглютинации прямую, при которой во взаимодействие со специфическими антителами непосредственно участвуют собственные антигены бактериальной или другой клетки, например эритроцитов, и непрямую, или пассивную, при которой бактериальные клетки или эритроциты являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов (или антител) для выявления специфических к ним антител (или антигенов). Реакцию агглютинации ставят на стеклянных пластинках или пробирках. Для постановки реакции вносят в лунки (пробирки) вносят разведенную 0,85% раствором NaCl сыворотку и равный объем суспензии стандартного диагностикума. Учет результатов реакции агглютинации проводят через 2 часа инкубации при 37 градусах. Оценку осуществляют по четырехкрестной системе. Реакция обязательно сопровождается контролем сыворотки и контролем антигена.

Классическая реакция агглютинации предусматривает использование корпускулярных антигенов. Однако в ней могут участвовать и растворимые антигены. Чтобы это стало возможным, такие антигены адсорбируют на иммунологически инертных частицах. В качестве носителя наиболее часто применяют в настоящее время эритроциты человека или животных.

Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизированными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют - реакцией непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА), так как эритроциты участвуют в ней пассивно.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) ставится в специальных полистироловых пластинах с луночками с полусферическим дном. При использовании реакции для серологической диагностики готовят двукратные разведения в физрастворе исследуемой сыворотки и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизируемых эритроцитов. Учет через 2 часа после инкубации при 37° по 4-х крестной системе. При положительной реакции агглютинировавшие эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, осадок выглядит в виде маленького "диска " в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА является последнее ее разведение, которое дает еще ярко выраженную гемагглютинацию без значительных признаков наличия " диска".

РПГА может применяться также в качестве ускоренного метода диагностики для обнаружения в исследуемом материале неизвестных бактерий, вирусов. При таком варианте постановки в роли известного компонента реакции используют эритроциты адсорбировавшие известные по своей специфичности антитела -антительный эритроцитарный диагностикум. Если исследуемый материал содержит достаточное количество антиген, РПГА будет положительная.

Вариантами использования РПГА являются реакция нейтрализации антигена (РНАг), реакция нейтрализации антител (РНАт), реакция торможения пассивной геммагглютинации (РТПГА). Для этих реакций используют антигенные и антительные эритроцитарные диагностикумы.

Принцип реакции геммагглютинации (РГА) - основан на способности вирусов гриппа и парагриппа агглютинировать (склеивать) эритроциты многих животных и человека.

Принцип реакции торможения геммаглютинация (РТГА) - основан на торможении агглютинации эритроцитов при связывании антигена специфической сывороткой.Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий), “склеенных” антителами.РА используют для: определения возбудителя, выделенного от больного,определения антител в сыворотке крови больного;определения групп крови.

Рис. 14. Реакция агглютинации

Определение возбудителя, выделенного от больного

Ориентировочная реакция агглютинации на стекле.

К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1:20) добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.

Рис.15. Схема реакции агглютинации

Развернутая реакция агглютинации с возбудителем, выделенным от больного. К разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного.