Космиды и их применение

Космиды — это плазмидные векторы, в ко-торые встроен участок генома фага Я, обеспечи-вающий возможность упаковки этой молекулы

ДНК в фаговую частицу. Необходимыми компо-нентами космидного клонирующего вектора яв-ляются:

• плазмидный участок начала репликацииДНК и детерминанта устойчивости к анти-биотику;

• единичное число мест гидролиза одной илинесколькими рестриктазами, пригодныхдля клонирования фрагментов ДНК;

• фрагмент ДНК, содержащий ковалентно за-шитые липкие концы фага Я (cos-сайт).

Кроме того, космида должна иметь неболь-шой размер, чтобы можно было клонироватьфрагменты ДНК длиной более 30 тпн. приведен на рис. 2.20. Лигированию подверга-

ется смесь молекул космидной и клонируемойДНК, гидролизованных определенной рестрик-тазой. При этом космида находится в высокойконцентрации. Среди большого многообразияпродуктов лигазной реакции образуются также

молекулы, состоящие из клонируемых фраг-ментов ДНК, к обоим концам которых пришитыкосмиды так, что оба cos-сайта находятся в оди-

наковой ориентации и между этими cos-сайта-ми сосредоточена вся генетическая информа-ция космиды. Когда такие молекулы инкубируют в реак-

ции упаковки ДНК фага Я in vitro, cos-сайты,фланкирующие чужеродную ДНК, расщепля-ются фаговыми ферментами с образованием од-

ноцепочечных липких концов, и получившиесямолекулы ДНК упаковываются в фаговые кап-сиды. После инфекции клеток Е. coli образовав-

шимися in vitro фаговыми частицами гибрид-ные ДНК внедряются в клетки, циклизуются полипким фаговым концам, реплицируются какплазмиды и детерминируют устойчивость к оп-ределенному антибиотику. В процессе упаков-ки гибридных ДНК in vitro происходит отборгибридов, суммарный размер ДНК которых со-

ставляет 38-51 тпн. Наиболее популярные кос-мидные векторы имеют размер 4-6 тпн, поэто-му в них ожно клонировать фрагменты ДНК длиной от 35 до 45 тпн.

Космиды-это плазмиды,несущие соs участок(липкие концы).Наличие соs участка позволяет произодить упаковку ДНК в головку фага in vitro.Таким образом ,космиды могут быть введены в клетку не с помощью трансформации,а путём обычной инфекции.Космиды-векторы с наибольшей емкостью, и поэтому они специально предназначены для клонирования больших фрагментов эукариотической ДНК и создания клонотек геномов.После инфекции рекомбинантная ДНК с помощью липких концов фага замыкается в кольцо и поддерживается в клетке как плазмида за счёт области космиды,ответственной за репликацию(оri)