Определение рН потенциометрическим методом

При потенциометрическом определении рН измеряли электродвижущую силу, возникающую на элетородах при погружении их в исследуемый раствор и зависящую от концентарции в нем ионов водорода.

В работе использовали рН-метр фирмы “Piccolo” со стеклянным электродом. Он обеспечивает быстрое измерение с точность, соответствующей 0,01-0,03 единицы рН. Область оптимального использования рН-метра-в пределах рН от 1 до 9; при рН от 9 до 11 получается приближенные результаты, при рН выше 11- ошибочные, что зависит от концентрации ионов натрия. В растворах 50-70%-ного спирта в интервале рН 4-8 точность измерений такая же, как и в водных растворах, но других значениях рН и более высоких концентрациях спирта стеклянный электрод не применяют [9].

Анализ проводили в трех параллельных пробах.

Перед началом работы на рН-метре проводили корректировку показаний прибора по буферным растворам с известной величиной рН. Буферные растворы готовили из специальных стандарт-титров, для получения которых используют реактивы, имеющие квалификацию “для рН-метрии”. Температура анилизируемого раствора устанавливали с помощью автомотического термокомпенсатора. Промытый дистиллированной водой электрод сушили фильтровальной бумагой, а затем помещали в сосуд с испытуемым раствором и измеряли его рН. По окончанию работы электроды, тщательно промыли и оставили до последующего использования в дистиллированной воде.

2.2.5 Количественный учёт микроорганизмов микробиологическим ме­тодом

Для количественного определения микроорганизмов использовали чашечный метод. Образцы растворов кератина . Из усредненной пробы на технических весах взвеши­вали 1 мл,. материала, который вносили в стерильную пробирку и заливали 9 мл. сте­рильного физиологического раствора, тщательно взбалтывали и термостатировали 2 ч. при температуре 37° С. Таким образом получали первое разведение 1:10. Далее стерильными пипетками готовили серийные разведения: из 1-ой пробирки брали 1 мл. экстрагированного раствора и вносили во 2-ю пробирку с 9 мл. физ. раствора (1:100), из 2-ой - 1мл. в 3-ю (1:1000) и.д. до разведения со степенью предпола­гаемого обсеменения микробами.

Для определения общего количества бактерий использовали среду МПА. 1 мл. необходимого разведения вносили в пустую стерильную чашку Петри и зали­вали (10-15 мл.) стерильным расплавленным и охлаждённым до температуры 43-45° С агаром. Осторожно перемешивая чашки круговыми движениями, засеянный материал равномерно распределяли в среде. После застывания агара чашки дном вверх помещали в термостат при температуре 37 °С. После термостатирования в течение 24-72 ч. подсчитывали (пользуясь лупой) выросшие на чашке колонии. Для учёта обсеменения плесневыми грибами и дрожжевыми формами мик­роорганизмов использовали среду Сабуро. 1 мл. исследуемого экстракта или его разведения вносили в стерильную чашку Петри с уже астывшей средой. Тщатель­но распределяли засеянный материал по поверхности агара. Термостатировали дном вверх при температуре 26-28° С в течение 3-7 суток.

При наличии на чашке небольшого числа колоний (не более 100) их подсчи­тывали со стороны дна, отмечая учтённые колонии чернилами. При более высоком количестве колоний (200-300) для удобства подсчёта дно чашки делили восковым карандашом на секторы и подсчитывали число колоний в каждом секторе. Резуль­таты, полученные при подсчёте колоний в отдельных секторах, суммировали, на­ходили среднее арифметическое и, умножая полученное число на разведение, оп­ределяли количество микробов в 1 мл. или в 1 г. Для учёта обсеменения плесневыми грибами и дрожжевыми формами мик­роорганизмов использовали среду Сабуро. 1 мл. исследуемого экстракта или его разведения вносили в стерильную чашку Петри с уже остывшей средой. Тщатель­но распределяли засеянный материал по поверхности агара. Термостатировали дном вверх при температуре 26-28° С в течение 3-7 суток.

При наличии на чашке небольшого числа колоний (не более 100) их подсчи­тывали со стороны дна, отмечая учтённые колонии чернилами. При более высоком количестве колоний (200-300) для удобства подсчёта дно чашки делили восковым карандашом на секторы и подсчитывали число колоний в каждом секторе. Резуль­таты, полученные при подсчёте колоний в отдельных секторах, суммировали, на­ходили среднее арифметическое и, умножая полученное число на разведение, оп­ределяли количество микробов в 1 мл. или в 1 г.