Лабораторные работы. Лабораторная работа № 1.Определение кальция в сыворотке крови (метод Мойдина и Зака)

Лабораторная работа № 1.Определение кальция в сыворотке крови (метод Мойдина и Зака)

Принцип метода. Метод основан на способности органических соединений-комплексонов взаимодействовать с ионами кальция. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА, или динатриевая соль этилендиаминтетраацетата). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с индикатором-мурексидом. Момент полного связывания кальция с трилоном Б определяется по изменению цвета мурексида (в комплексе с ионами кальция мурексид красно-оранжевого цвета, свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет). Комплекс кальция с трилоном Б более прочен, чем комплекс с мурексидом. Зная концентрацию и объем раствора трилона Б, пошедшего на титрование, находят содержание кальция.

Нормальное содержание кальция в сыворотке крови 2,25–2,64 ммоль/л (9–11 мг%). Состояние гипокальциемии наблюдается при авитаминозе D (рахите), у беременных, при недостаточной функции паращитовидной железы, заболеваниях почек, отравлениях фторидами. Гиперкальциемия встречается реже (гиперпаратиреоз, опухоли, деструктивные процессы в костной ткани, лейкозы).

Ход работы.

В два стаканчика (опытная и контрольная пробы) наливают по 5 мл раствора мурексида. В стаканчик для опытной пробы вносят 0,2 мл исследуемой сыворотки крови (раствор становится розовым). Титруют из пипетки или бюретки раствором трилона Б до исчезновения розовой окраски и восстановления фиолетового цвета (сравнивать с окраской контроля).

Расчет. Исходя из того, что 1 мл 0,1 моль/л раствор трилона Б эквивалентен 0,12 мг Ca, рассчитывают содержание кальция в сыворотке крови, в мг%:

X = V ´ 0,12 ´ 100,

где V – объем трилона Б, пошедший на титрование опытной пробы, мл.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

Лабораторная работа № 2.Титрометрический метод определения "щелочного" запаса крови

Принцип метода. Количество всех оснований цельной крови составляет ее щелочной запас. К цельной крови добавляют для нейтрализации всех оснований заведомо большее количество соляной кислоты. Избыток кислоты оттитровывают щелочью до значения pH (pH = 5,0), равного изоэлектрической точке основных белков крови, которые выпадают в осадок, при этом появляется легкое белесоватое помутнение. Щелочной запас выражается в МЭКВ щелочи, соответствующих количеству связанной основаниями крови соляной кислоты, в перерасчете на 1 л крови.

Ход работы. В стаканчик вносят 10 мл 0,01н раствора соляной кислоты, добавляют 0,2 мл крови, тщательно перемешивают. Прозрачный бурый раствор титруют из пипетки 0,1н раствором NaOH до появления легкого белесоватого помутнения.

Расчет производят по формуле

(1 – а) ´ 0,1 ´ 1000

мэкв/л NaOH = ¾¾¾¾¾¾¾¾¾,

0,2

или

(1 – а) ´ 4 ´ 100

мг% NaOH = ¾¾¾¾¾¾¾¾,

0,2

В норме щелочной запас составляет 100–115 мэкв/л, или 400–460 мг% NaOH.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

Рекомендуемая литература

Основная

1 Материал лекций.

2 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 438–464; 1998. С. 567–599.

3 Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 435–439.

Дополнительная

4 Агапов Ю. А. Кислотно-щелочной баланс. М.: Медицина, 1968.

5 Робинсон Дж. Кислотно-щелочное равновесие. М.: Медицина, 1970.

6 Рут Г. Кислотно-щелочное равновесие и электролитный баланс. М.: Медицина, 1978.

7 Гомеостаз / Под ред. П. Д. Горизонтова. Медицина, 1980.

8 Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 2. С. 319–325.

9 Зилва Дж.Ф., Пэнелл П .Р. Клиническая химия в диагностике и лечении. М.: Медицина, 1986.

10 Руководство по клинической лабораторной диагностике. Т. 3. Клиническая биохимия / Под ред. М. А. Базарновой. Киев, 1991.

11 Клиническая оценка лабораторных тестов / Под ред. И. У. Тица. М.: Медицина, 1986.