Методы определения коли-титра и коли-индекса воды.

1. Метод мембранных фильтров.

Берут объем воды равный коли-титру (333) разделяют на 4 части:3,30,100,200мл и фильтруют через разные фильтры., которые накладывают на поверхность среды Эндо. Затем подсчитывают количество красных, лактозоположительных колоний, готовят из них мазки, окрашивают по Граму в поисках Грам-палочек, определяют оксидазный тест, он должен быть у БГКП отрицательным.

Затем пересевают колонии с Грам- палочками и отрицательным оксидазным тестом на глюкозо-пептонную среду и инкубируют в термостате при 37?. Определяют брожение, далее рассчитывают коли-индекс, колититр.

Если вода не удовлетворяет требованиям ГОСТа, определяют в дополнительном исследовании свежесть фекального загрязнения. Для чего бродильный тест ставят при 43⁰ С. Положительный результат на среде с лактозой при 43⁰ С свидетельствует о свежем фекальном загрязнении.

2 Метод бродильных проб. Объем воды 333мл разделяют на 9 объемов (3 по 1мл, 3 по 10мл, 3 по 100мл). Засевают эти объемы на глюкозопептонную среду Эйкмана, инкубируют при 37?С. При наличии роста делают пересев из этих объемов на среду Эндо, далее лактозоположительные окрашенные колонии идентифицируют как в предыдущем методе. Коли-титр и коли-индекс определяют по специальным таблицам. При несоответствии этих показателей ГОСТу производят дополнительное исследование на наличие Е.coli как показателя свежего фекального загрязнения.

9. Понятие об эпифитных и фитопатогенных микроорганизмах.

Эпифитные микроорганизмы – это микробы, которые развиваются в норме на поверхности растений. Они не наносят вреда растению, являются антагонистами фитопатогенных микробов, препятствуют проникновению фитопатогенных микробов в растительные ткани, усиливают иммунитет растений.Состав микрофлоры растения зависит от вида, возраста растений, типа почвы, температуры окружающей среды, влажности. При повышенной влажности количество эпифитных микробов возрастает, а при понижении – уменьшается. Около корней растений находится большое количество микробов. Эта зона ризосферы. В ризосфере обитают неспорообразующие Грам- палочки, микобактерии, актиномицеты, спорообразующие палочки, грибы. Они обладают антагонистическими свойствами против фитопатогенных, переводят различные субстраты в соединения, доступные для растений, синтезируют биологически активные соединения (витамины, антибиотики и др.), вступают в симбиотические взаимоотношения с растениями. Растения окультуренных почв больше обсеменены микробами, чем растения лесов и лугов. Особенно много микробов в нижней прикорневой части растения. Больше микробов на растениях, растущих на свалках, у дорог, в местах выпаса скота. Фитопатогенные бактерии вызывают болезни растений – бактериозы. Различают бактериозы: общие, местные. Общие бактериозы вызывают гибель всего растения, или его отдельных частей. Они могут проявляться на корнях (корневые гнили) или в сосудистой системе растения.

Местные бактериозы ограничиваются поражением отдельных участков растений, проявляясь на паренхиматозных тканях: ожоги, увядания, появление мокрой или водянистой гнили, пятнистости, бактериального рака. Возбудители бактериоза передается через семена, почву, воду, воздух, через насекомых, нематод, моллюсков. Они проникают через устьица растений,

нектарники, и через небольшие повреждения. Когда бактерии проникают в растительные клетки – они мацерируются и отслаиваются друг от друга. Этот путь называется интрацеллюлярным, а заболевания – паренхиматозными.

Вирусы могут вызывать: мозаичную болезнь, желтуху.

Грибы вызывают микотоксикозы. Например: спорынья – гриб поражает колоски, на них образуются рожки – склероции гриба.

Для борьбы с фитопатогенными бактериями необходимо проводить следующие мероприятия: возделывать выносливых растений, очищать и обрабатывать семена, обеззараживать почву, удалять пораженные растения, уничтожать переносчиков возбудителей болезней растений.

10. Источники и причины микробного загрязнения лекарственного растительного сырья и готовых лекарственных средств.

Обсеменение лекарственного сырья может проходить на всех этапах его заготовки и при хранении. Активному размножению микробов способствует : повышения влажность, неправильное хранение, несоблюдение санитарно-гигиенического режима в помещении.

Для соблюдения санитарно-гигиенического режима изготовления лекарственных препаратов проводится санитарно-микробиологический контроль: воздуха, предметов обихода, рук аптечных работников, лекарственных препаратов, воды. Стерильными должны быть: лекарственные препараты для парэнтерального применения, инъекционные препараты, глазные капли, препараты для новорожденных, мази. Иногда в стерильных препаратах могут содеражаться пирогены – продукты распада микробных клеток – это эндотоксины – липополисахаридные комплексы.

Растворы, которые используются для инъекций должны содержать до стерилизации не более 30 микробных клеток в 1 мл., и время от момента их изготовления до стерилизации не должно превышать 1,5 часа; микробное число дистиллированной воды до стерилизации не должно больше 10.

Проверить наличие пирогена в лекарственной форме возможно путем постановки биологической пробы на животных.

Контроль стерильности лекарственных средств проводится путем посева на среды для выявления различных бактерий.

Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определяют путем мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным. Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микробы в допустимых количествах. Для этого проводят количественные определение жизнеспособных бактерий и грибов в 1г или 1мл препарата.

В 1г или 1мл лекарственного сырья для приема внутрь должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов. Для применения в полость уха, носа, интравагинально количество микробов не должно превышать 100 в 1г или 1мл.

В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на таблетку.