Количественное определение микроорганизмов

Испытание проводят двухслойным агаровым методом в чашках Петри диаметром 90-100 мм. Образец лекарственного сред­ства в количестве 10 г (мл) растворяют, суспендируют или эмульгируют в фосфатном буферном растворе рН 7,0 так, чтобы конечный объем раствора (суспензии, эмульсии) был 100 мл.

Посевы просматривают ежедневно.

Определение общего числа бактерий. Приготовленный раст­вор (суспензию, эмульсию) образца вносят по 1 мл в каждую из двух пробирок с 4 мл расплавленной и охлажденной до тем­пературы от 45 до 50º С среды №1.

Среда № 1:

пептона ферментативного сухого 10 г

натрия хлорида 5 г

глюкозы 1 г

агара микробиологического 13 г

мясной воды (1:2) 1000 мл

Быстро перемешивают со­держимое пробирки и переносят в чашку Петри, содержащую 15-20 мл застывшей питательной среды №1. Быстрым покачи­ванием чашки Петри равномерно распределяют верхний слой агара. После застывания среды чашки переворачивают и инкуби­руют в течение 5 сут при температуре от 30 до 35º С. Через 48 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают число бактериальных колоний на двух чашках, находят среднее значение и, умножая его на показатель разведения, вычисляют число бактерий в 1 г (мл) образца.

Для получения достоверных результатов учитывают только те чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний. Если при разведении образца 1: 10 нет роста, результаты отмечают сле­дующим образом: «В 1 г (мл) лекарственного средства (сырья) менее 10 бактерий».

Если число колоний на чашке превышает 300, делают ряд дальнейших последовательных разведений образца (1:100, 1:1000 и т. д.), выбирая для посева разведение, наиболее соот­ветствующее указанному выше уровню.

Определение общего числа грибов. Испытание проводят двухслойным агаровым методом, используя среду №2.

Среда № 2 (Сабуро):

пептона ферментативного сухого 10 г

глюкозы 40 г

агара микробиологического 13 г

воды очищенной 1000 мл

Посевы инкубируют в течение 5 сут при температуре от 20 до 25º С. Через 72 ч и окончательно через 5 сут подсчитывают общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов на двух чашках. Находят среднее значение и, умножая его на показатель разведения, т. е. на 10, вычисляют число грибов в 1 г (мл) образ­ца. В случае, если число колоний грибов на чашке превышает 300, делают ряд дальнейших разведений образца. На чашке учи­тывают все колонии грибов, даже если их число менее 30.

Мази выпускают в тубах и склянках, если необходимо, то темного стекла.

Хранение. Как правило, мази хранят в прохладном, сухом, защищенном от света месте, если нет других указаний в частных статьях.