Электрофорез

Это электрофоретическое разделение белков сыворотки крови на фракции на хроматографической бумаге. Метод основан на способности белков приобретать заряд в растворе и перемещаться в поле постоянного электрического тока. Поскольку каждая фракция белков имеет свой аминокислотный состав, то при определенном значении рН (например, рН 8,6) все белки данной фракции будут иметь один знак заряда (–), но отличаться величиной заряда. Соответственно все они будут перемещаться в поле постоянного электрического тока в одну сторону, но с различной скоростью.

Таким образом, на скорость передвижения белков в поле постоянного электрического тока влияют следующие факторы:

- величина заряда белковой фракции;

- молекулярная масса (размеры белка);

- поддерживающая среда для электрофореза (хроматографическая бумага, ПААГ, агароза и др.);

Электрофорез проводят в электрофоретических камерах, заполненных буфером, рН которого равен 8,6. Все белковые фракции сыворотки крови приобретают «отрицательный» заряд и следовательно будут перемещаться в поле постоянного электрического тока от катода (К^–) к аноду (А⁺). Для того, чтобы белковые фракции «прошли путь и разделились» из смеси белков на фракции линия старта должна находиться ближе к катоду (рис. 9)

линия старта глобулины альбумины хроматографическая

(место нанесения бумага

белков сыворотки

крови)

Рис. 9. Электрофореграмма белков сыворотки крови

на хроматографической бумаге

Через 6–10 часов электрофорез останавливают, белки на полоске хроматографической бумаги фиксируют соляной кислотой (белки денатурируют) и окрашивают бромфеноловым синим красителем. На электрофореграмме проявляются окрашенные пятна фракций белков.

Самая электроподвижная фракция – это низкомолекулярные белки (альбумины), которые обладают высокой величиной отрицательного заряда.