Орієнтовна основа дії при виконанні практичної роботи

1.Оглянути підрозділи мікробіологічної лабораторії, які існують на кафедрі (ознайомлення може бути також за допомогою таблиць або відеофрагментів), звернути увагу на наявне устаткування, з‘ясувати його призначення. Уважно оглянути робоче місці лаборанта-мікробіолога, роздивитися найбільш використовувані інструменти та лабораторний посуд.

У протоколі відмітити підрозділи бактеріологічної лабораторії, основне обладнання, вказати призначення.

2.Ретельно вивчити правила техніки безпеки при роботі у мікробіологічній лабораторії за наведеною інструкцією

Техніка безпеки у бактеріологічній лабораторії:

а) заборонено–палити, приймати їжу.

б) робоче місце повинно бути чистим. Особисті речі зберігати в спеціальних місцях.

в) в разі потрапляння зараженого матеріалуна стіл, підлогу та ін. ці місця обробити дезинфікуючим розчином.

г) реєстрація, зберігання, нагляд та знищення патологічних мікробів повинно бути зроблено за спеціальною інструкцією.

д) по закінченню роботи необхідно старанно вимити руки, а при необхідності обробити дезинфікуючим розчином.

Зіставити вивчені правила із своїми спостереженнями під час виконання попереднього завдання. У протокол записати основні чинники небезпеки, що мають місце у бактеріологічній лабораторії.

3. Ознайомитися з основними видами мікроскопії:

а) темнопольна мікроскопія заснована на явищі дефракції світла при вели-кому боковому освітленні виважених в рідині найдрібніших частинок. Це досягається за допомогою параболоїд або кардіоїд – конденсатора.

б) фазово - контрастна мікроскопія заснована на перетворенні змін по фазі, які виникають при проходженні світової хвилі через фазові (прозорі) об’єкти, в зміні по амплітуді які видимі оком. Позитивним фазовим контрастом нази-вають темне забарвлення об’єктів в світлому полі зору, негативним фазовим контрастом – світле забарвлення об’єкту на темному фоні. Для фазово-контрасної мікроскопії використовують звичайні мікроскопи і фазово – контрастні пристрої КФ-1 або КФ-4.

в) люмінесцентна (флюорисцентна) мікроскопія основана на явищі фотолюмі-несценції.
(Futen-світло). Люмінесцентне випромінювання речовин виникає після дії на них якихось джерел енергії: світла, електричних променів, іонізуючого випромінювання, фотолюмінісценція - люмінісцюючого об’єкту під впливом світла.

Первинна люмінісценція – без пофарбування об’єктів, вторинна – (наведено) після фарбування препаратів спеціальними фарбами флюорохромами. Переважно - можливо виявлення живих бактерій в невеликих кількостях.

г) електронна мікроскопія дозволяє виявити об’єкти, розміри яких лежать за межами роздільної можливості світлового мікроскопа (0,2 мкм). Електронний мікроскоп використовується для вивчення вірусів, макромолеку-лярних структур і інших субмікроскопічних об’єктів. Світлові промені в таких мікроскопах замінюють потоком електронів, які мають прискорення, довжину хвилі біля 0,005 нм., тобто в 1000000 разів коротше довжини хвилі видимого світла. Окрім цього використовують скануючі електронні мікро-скопи які дозволяють рельєфно зображати поверхні об’єкту.

Відмітити у протоколі основні види мікроскопії та вказати фізичні принципи, на яких вони базуються.

4.Розглянути під мікроскопом готові фіксовані препарати мікроорганізмів.

Мікроскопія мазків за допомогою імерсійної системи : на підготовлений мазок наноситься крапля імерсійного масла, який ставиться на предметний столик, після чого повернути револьвер до відмітки імерсійного об’єктиву *90, потім опускати тубус мікроскопа до поглиблення об’єкту в краплю масла; встано-вити орієнтировочний фокус при допомозі макрогвинта; провести завершу-юче фокусування предмета макрогвинтом, повертаючи його в межах тільки одного оберту. Не припускаючи сплющення об’єктиву з препаратом, так як це може визвати пошкодження препарату або фронтальної лінзи. Після закінчення роботи з мікроскопом спеціальною ганчіркою протерти масло з імерсійного об’єктиву і привести револьвер на малий сухий об’єктив *8.

Записати до протоколу етапи мікроскопії при використанні мікроскопу з імер-сійною системою.

Після ознайомлення з теоретичними питаннями і ході проведення експерименту вам пропонується виконати наступні навчальні завдання:

1.У навчальній лабораторії при дослідженні суспензії калу хворого черевним тифом студент розлив патологічний матеріал на лабораторному столі. Що необхідно зробити, щоб виправити цю недбалість?

2.Вивчити морфологію бактерій, пофарбованих мазків використовують імерсійну систему світлового мікроскопу. За якою ознакою можна відрізнити імерсійні об’єкти?

3.Студент одержав завдання вивчити морфологію бактерії у пофарбованому мазку. Для цього він помістив препарат на предметний столик мікроскопу, вибравши об’єкти зі збільшенням *40. Освітивши поле зору, знайшов забарвлення, встановив чіткість мікрогвинтом і пересунув кілька колів, зробив висновок, що розгледіти мікропрепарат майже неможливо. В чому помилився студент? Чому йому не вдалося детально розгледіти форму мікроорганізмів в препараті?

Додаток 2