Практическая работа. Инструкция к практическому занятию

Инструкция к практическому занятию

Количественное определение фруктозы

Принцип метода. Метод основан на том, что при нагревании фруктозы (и других кетогексоз) с соляной кислотой образуется оксиметилфурфурол, который с резорцином образует соединение, окрашенное в вишнево-красный цвет.

Эту реакцию дают и альдогексозы (например, глюкоза), однако скорость образования оксиметилфурфурола из фруктозы при определенных условиях во много раз больше, что и обусловливает специфичность данной реакции.

Методика работы: к 2 мл испытуемой пробы в пробирке с шлифованным обратным холодильником добавляют 2 мл раствора резорцина и 6 мл 30%-ного раствора соляной кислоты, перемешивают и нагревают на водяной бане при 80 С в течение 8 мин. Одновременно с опытом ставят контроль. К 2 мл стандартного раствора, содержащего 50 мкг фруктозы, добавляют далее все остальные реактивы, как в опытной пробе. После нагревания растворы охлаждают и колориметрируют на ФЭКе при 490 нм. Экстинкцию измеряют против реактивов, заменяя фруктозу 2 мл воды. Содержание фруктозы в пробе, взятой для анализа, вычисляют по формуле:

а ´ Е

с = ¾¾¾¾¾,

Е₁

где с – содержание фруктозы (в мкг);

а – содержание фруктозы в пробе стандартного раствора (в мкг);

Е – экстинкция исследуемого раствора;

Е₁ – экстинкция стандартного раствора.

Оборудование. 1) Фотоэлектроколориметр. 2) Водяная баня. 3) Пробирки с обратным холодильником. 4) Колбы мерные на 100 и 500 мл. 5) Мерные пипетки на 2, 5, 10 мл.

Реактивы. 1) 0,1%-ный раствор резорцина в этаноле. 2) 30%-ный раствор соляной кислоты. 3) Стандартный раствор фруктозы (0,25 г фруктозы растворяют в 100 мл воды в мерной колбе)

Реакция Троммера

Химизм реакции. В щелочном растворе редуцирующие (восстанавливающие) моно− и дисахариды восстанавливают гидроксид меди (II) в оксид меди (I):

С₅Н₁₁O₅−CОН + 2 Cu(OH)₂ ®С₃Н₁₁−CООН+ 2 CuOH + H₂O

Глюкоза Глюконовая ¯

кислота Сu₂О

Оксид меди

Методика работы: в пробирку наливают 1 мл раствора глюкозы и равный объем 10%−ного раствора гидроксида натрия. К смеси прибавляют при встряхивании по каплям 5%−ный раствор сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди (II). Осторожно нагревают верхнюю часть содержимого пробирки. Появляется желтое окрашивание (гидроксид меди (I)), переходящее в красное (оксид меди (I)), что указывает на положительную реакцию Троммера.

Оборудование: 1) штатив с пробирками; 2) спиртовки; 3) пипетки; 4) пробиркодержатели.

Реактивы: 1) 10% раствор гидроксида натрия; 2) 5% раствор сульфата меди