Временные границы полуколичественного анализа мочи с помощью тест-полосок

Качественный результат тестирования по всем параметрам тест-полоски, за исключением содержания лейкоцитов, можно получить через 1–2 мин. Для получения полуколичественного результата анализа следует точно соблюдать время по каждому параметру.

Можно провести исследование пригодных для тестирования полосок при помощи анализатора мочи "КЛИНИТЕК" (в случае наличия такового), строго соблюдая инструкцию по эксплуатации данного прибора (количественный анализ).

Определение индивидуальных показателей

Вначале целесообразно определить цвет, прозрачность и запах мочи.

1 Определение pH мочи

Принцип метода. Реагентная зона содержит 2 индикатора кислотности, которые способны изменять свою окраску при определенной pH среды: 0,2 % метилового красного; 2,8 % бромтимолового синего и 97 % нереактивных элементов. Диапазон чувствительности лежит в пределах pH = 5,0 … 8,5.

Метиловый красный – основной индикатор [интервал pH перехода окраски красной (более кислая среда) в желтую (более основная среда) – 4,2–6,3]:

Бромтимоловый голубой – кислый индикатор [интервал pH перехода окраски желтой (более кислая среда) в синюю (более основная среда) – 6,0–7,6]:

Реакция мочи изменяется при патологических состояниях. Кислая моча отмечается при голодании, сахарном диабете (в основном за счет кетоацидоза), лихорадочных состояниях, подагре (гиперурикурия). Щелочная моча бывает при рвоте (потеря Н⁺ с содержимым желудка), приеме некоторых препаратов (питьевая сода и т. п.), воспалении мочевого пузыря (цистит), пиелите, что связано с повышением уреазной активности патологической микрофлоры:

Карбамидамидогидролаза

2 Определение содержания глюкозы в моче

Перекись водорода при участии фермента пероксидазы тут же реагирует с иодидом калия, вызывая коричневое окрашивание:

Состав реагентной зоны: глюкозооксидаза – 2,2 %; пероксидаза хрена – 1,0 % (сопряженные ферментные системы); иодид калия (хромоген) – 8,1 %; буфер (для создания оптимума pH действия ферментов) – 69,8 %; нереактивные элементы – 18,9 %. Границы чувствительности, т. е. минимально определяемая концентрация – 75–125 мг/дл (4–7 ммоль/л). Физиологические концентрации не учитываются – проба отрицательна. Положительна при концентрации глюкозы в моче выше 5,5 ммоль/л. Цвет реагентной зоны изменяется от зеленого до коричневого. Диапазон чувствительности: 5,5 – больше или равен 111 ммоль/л, 1 – больше или равен 20 г/л.

Примечание – При высокой концентрации в моче глюкозы окрашивание реагентной зоны может быть неравномерным. В этом случае оценку следует проводить по наиболее темному тону. Чувствительность реакции снижается при увеличении удельного веса мочи и может зависеть от колебания температуры. Высокая концентрация аскорбиновой кислоты (и других восстанавливающих веществ) и/или кетоновых тел при низкой концентрации глюкозы может привести к неправильному (ложноотрицательному) результату, а присутствие производных фенолфталеина и сульфофталеина – к ложноположительному.

Клинико-диагностическое значение. В моче здорового человека глюкоза присутствует в виде следов (не более 0,4 г/л) и не определяется обычными химическими реакциями, так как она практически полностью реабсорбируется в проксимальных канальцах нефронов. В этом процессе принимают участие ферменты Е₁ гексокиназа (глюкокиназа) и E₂ щелочная фосфатаза:

Повышение концентрации глюкозы в моче – глюкозурия. Различают 2 группы глюкозурий: гипергликемические и нормогликемические. В случае гипергликемических глюкозурий увеличение содержания глюкозы в моче связано с повышением ее концентрации в плазме крови. Почечный порог для глюкозы составляет приблизительно 9,9 ммоль/л. Среди гипергликемиче­ских глюкозурийвыделяют физиологические и патологические.

Физиологические:

1 Алиментарная – при приеме пищи, богатой углеводами.

2 Эмоциональная – при психоэмоциональном напряжении (связана в основном с повышенной стимуляцией адреналином мобилизации гликогена печени, а также с инициацией кортикостероидами процессов глюконеогенеза).

3 При воздействии некоторых лекарственных препаратов: преднизолона, кофеина (повышение концентрации внутриклеточной цАМФ приводит к активации каскадного механизма мобилизации гликогена).

Патологические:

1 Нарушения эндокринной регуляции углеводного обмена – сахарный диабет, синдром Иценко-Кушинга (увеличение концентрации глюкокортикоидов и, как следствие, усиление глюконеогенеза – стероидный диабет), акромегалия (интенсификация контринсулярных эффектов соматотропного гормона), феохромоцитома (избыточная продукция катехоламинов), тиреотоксикоз (гиперфункция тиреоидных гормонов).

2 Поражения центральной нервной системы – инсульты, травмы, опухоли головного мозга, энцефалиты.

3 Недостаточность продукции инсулина поджелудочной железой (опухоль, операция, панкреатит).

4 Болезни печени – гепатиты, цирроз, гемохроматоз.

5 Заболевания сердечно-сосудистой системы – гипертонический криз, инфаркт миокарда.

6 Интоксикации – воспаление легких, инфекции, диспепсии новорожденных, ожоги, отморожения, наркоз, лечение глюкокортикоидами и адренокортикотропином.

Нормогликемическая глюкозурия связана в основном с нарушением реабсорбции глюкозы в почечных канальцах. Причины:

1 Интоксикации ртутью, угарным газом, стрихнином, хлороформом, эфиром, морфином, флоридзином, кодеином, снотворными препаратами (например, барбитуратами), алкоголем (в последних случаях эффект связан с гипервосстановленностью пиридиновых коферментов).

2 Гломерулонефрит, хронический пилонефрит, нефросклероз, диабетический гломерулосклероз, врожденные тубулопатии (синдром Фанкони); беременность; почечный диабет (наследственная патология, связанная с генетически обусловленным изменением активности ферментов реабсорбции глюкозы в почечных канальцах).

3 Патологические процессы самой почечной ткани – хронический нефрит с проявлением нефротического синдрома при острой почечной недостаточности, вторичный почечный диабет.

3 Определение содержания билирубина в моче

Принцип метода. Диазониевая соль 2,4-дихлоранилина образует с билирубином азобилирубин – комплекс, окрашенный в лиловый цвет.

Состав реагентной зоны: 0,4 % диазониевой соли 2,4-дихлоранилина; 37,3 % – буфер; 62,3 % – нереактивные элементы. Границы чувствительности – 0,4–0,8 мг/дл (7–14 мкмоль/л).

Примечание – большое количество аскорбиновой кислоты в моче может привести к неправильному негативному результату.

Клинико-диагностическое значение. В норме моча содержит минимальные количества билирубина, не выявляемые обычными качественными пробами. Моча, содержащая желчные пигменты, будет иметь желтовато-коричневый или зеленый цвет. Незначительная билирубинурия (в виде щелочных солей) указывает на раннюю стадию заболевания печени. Значительное увеличение билирубина в моче связано с обтурационными желтухами ( например, закупорке желчного протока), а также с прогрессирующими паренхиматозными желтухами. Увеличение идет в основном за счет прямого билирубина. Непрямой билирубин появляется в моче при значительных поражениях почек.

4 Определение уробилиногена в моче

Принцип метода. Уробилиноген при взаимодействии с пара-диметил­ами­нобензальдегидом образует комплексное соединение розового цвета – уробилиногенальдегид.

Состав реагентной зоны: 0,2 % пара-диметиламинобензальдегида; 99,8 % – нереактивные элементы.

Границы чувствительности – 0,2 мг/дл (3,2 мкмоль/л). Диапазон чувстви­тельности: 0,2–8 мг/дл (3,2–131 мкмоль/л).

Примечание – Ложный позитивный результат может быть вызван реакцией с аминосалициловой кислотой и сульфанил-мочевиной; ложное окрашивание наблюдается и в присутствии бензойной кислоты. Ложный негативный результат может быть вызван формалином. Реактивность теста увеличивается с повышением температуры. Оптимум температуры 22 … 26 °C.

Клинико-диагностическое значение. У здоровых людей концентрация уробилиногена в моче составляет от 0,2 до 1,8 мг/дл. С 2 мг/дл начинается область патологии.

Уробилиноидурия наблюдается при:

1) паренхиматозных заболеваниях печени (гепатиты, циррозы, отравления, лихорадочные состояния, сопровождающиеся токсическим поражением печени) вследствие потери печенью способности задерживать и разрушать уробилиноген, всосавшийся из кишечника;

2) гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, рассасывание больших кровоизлияний, обширные инфаркты миокарда) из-за избыточного поступления билирубина во внепеченочные желчные пути и кишечник, где он восстанавливается бактериями в уробилиноген, который всасывается в тонком кишечнике и через venus portae попадает в печень, где в норме разрушается до три- и дипирролов (пропент-диопента и мезобилилейкана);

3) кишечных заболеваниях, связанных с усиленной реабсорбцией желчных пигментов слизистой оболочкой кишечника (энтероколиты, запоры).

Отсутствие в моче уробилиногена при повышенном содержании билирубина указывает на обтурационную желтуху.

5 Определение содержания белка в моче

Принцип метода. При взаимодействии альбумина с бромфеноловым голубым образуется комплекс зелено-голубого цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию альбумина.

Состав реагентной зоны: 0,3 % тетрабромфенолового голубого; 97,3 % – буфера; 2,4 % – нереактивных элементов.

Границы чувствительности – 15–30 мг/дл.

Диапазон чувствительности – 30 и больше или равно 2000 мг/дл (0,30 –больше или равно 20 г/л).

Примечание – Данный тест характеризует в основном содержание в моче альбумина. Глобулин, тела Бенс-Джонса, микропротеины выявляются слабее. Негативный результат наличия белка не исключает его присутствия. Сильно щелочная моча или растворение в моче антисептиков и средств дезинфекции, например хлоргексидина, может вызвать неправильный позитивный результат.

Клинико-диагностическое значение: В нормальной моче содержатся лишь следы белка (представлен главным образом уромукоидом – продуктом функционирования почечной ткани), не выявляющиеся обычными химическими методами. Появление белка в моче – протеинурия – свидетельствует о нарушении баланса между процессами его фильтрации и реабсорбции.

Виды протеинурий: преренальная, ренальная (клубочковая и канальцевая), постренальная, смешанная.

Причины протеинурий:

1 Преренальной: повышенное артериальное давление, сердечная декомпенсация; функциональные протеинурии, обусловленные:

а) усиленным распадом белков тканей при физической нагрузке, психо-эмоциональном напряжении, стрессорном состоянии;

б) повышенным гемодиализом, связанным с увеличением активности ренина в плазме.

2 Ренальной клубочковой (гломерулярной): усиление проницаемости базальной мембраны почечного фильтра (из-за уменьшения содержания в ней сиалогликопротеинов при врожденном нефротическом синдроме и при атаке протеазами нейтрофилов; из-за снижения отрицательного заряда на мембране, например, при сахарном диабете). Гломерулярная протеинурия встречается и при других патологических состояниях, сопровождающихся поражением почек: токсикозе беременных, амилоидозе, инфекционных и злокачественных заболеваниях, гломерулонефрите, нефропатиях.

3 Ренальной канальцевой (тубулярной) – тубулярные и интерстициальные нефропатии, нефрозы (нарушение реабсорбции – энергозависимого процесса, происходящего путем эндоцитоза белка с образованием эндосом, сливающихся с лизосомами, где идет протеолиз, и образовавшиеся аминокислоты через базальную мембрану тубулоцитов возвращаются в кровоток).

4 Смешанной ренальной – хронический пиелонефрит, диффузный абактериальный интерстициальный нефрит, хроническая почечная недостаточность при хроническом гломерулонефрите.

5 Постренальной (вызванной патологией мочевыводящих путей) – воспалительная экссудация, когда в мочу попадают слизь, кровь, гной из мочевыводящих путей.

6 Определение содержания кетоновых тел в моче

Принцип метода. Кетоновые тела образуют с нитропруссидом натрия комплексные соединения оранжево-красного (щелочная среда) и вишневого (при подкислении) цвета:

Состав реагентной зоны: 7,1 % – нитропруссида натрия; 92,9 % – буфера (ацетатного).

Граница чувствительности – 5–10 мг/дл (0,5–1,0 ммоль/л). Диапазон чувствительности – 0,05–1,6 г/л (0,5–16 ммоль/л).

Примечание – Неправильный позитивный результат может возникнуть в сильнопиг­ментированных пробах мочи или при наличии L-дофа-продуктов обмена в моче.

Клинико-диагностическое значение. Кетоновые тела в нормальной моче встречаются в самых ничтожных количествах. Появление небольшой концентрации кетонов в моче может быть вызвано физическими нагрузками, голоданием, недостаточным углеводным питанием (кетогенная диета), во время беременности или при занятии профессиональным спортом. Часто кетоны можно определить в моче до того, как повысится их концентрация в сыворотке крови (из-за действия физико-химических и физиологических механизмов коррекции нарушений кислотно-основного состояния) – ранняя диагностика. Значительная кетонурия наблюдается при сахарном диабете (недостаточность потребления глюкозы тканями приводит к активации альтернативных энергопродуцирующих метаболических путей: липолиза, бета-окисления жирных кислот; и синтеза других транспортных форм субстратов энергообмена – кетоновых тел); увеличении концентрации контринсулярных гормонов (акромегалия, стероидный диабет и т. п.); тиреотоксикозе (повышение расхода углеводов); подпаутинных кровоизлияниях в мозг; черепно-мозговых травмах; возбуждении ЦНС; болезни Гирке. В раннем детском возрасте продолжительные заболевания желудочно-кишечного тракта (дизентерия, токсикоз) могут привести к кетонурии в результате голодания и истощения.

7 Определение содержания нитритов в моче

Принцип метода и клинико-диагностическое значение. Принцип тестирования основан на том, что при патологии мочевыводящих путей находящиеся в них бактерии (граммотрицательные микробы) превращают нитраты мочи в нитриты. Розовые пятна или уголки не стоит воспринимать как позитивный результат. Если же возникает легкое окрашивание всей реагентной зоны в розовый цвет, то это указывает на существование характерных бактерий (более 10⁶ микробов/мл). Интенсивность окрашивания не пропорциональна количеству бактерий, и негативный результат не является показателем полного отсутствия бактерий.

Состав реагентной зоны: 1,4 % пара-арсаниловой кислоты; 1,3 % 1,2,3,4-тетрагидробензохинолин-3-ола; 10,8 % буфера; 86,5 % нереактивных элементов.

Границы чувствительности – 0,06–0,10 мг/дл (13–22 мкмоль/л) NO₂^-.

Примечание – Ложный негативный результат может возникнуть если: 1) время нахождения мочи в мочевом пузыре менее 4 часов (поэтому для анализа рекомендуется брать утреннюю мочу, т. к. чем больше время нахождения мочи в мочевом пузыре, тем точнее результат анализа); 2) возбудитель инфекции мочевыводящих путей действует непроизводительно; 3) в силу особенностей питания в моче мало нитратов. Ложнонегативный результат также может быть при высоких концентрациях в моче аскорбиновой кислоты и одновременном низком содержании нитритов.

8 Определение содержания эритроцитов в моче

Принцип метода. Основан на том, что гемоглобин эритроцитов, обладая пероксидазной активностью, разлагает диизопропиленбензона дигидропероксид с выделением атомарного кислорода, который окисляет 3,5,3',5'-тетраметилбензидин в соединение зеленого цвета:

Границы чувствительности – 0,015–0,062 мг/дл Hb.

Диапазон чувствительности – 10–200 эритроцитов/мкл.

Для свободного гемоглобина реагентная зона окрашивается равномерно в зеленый цвет. Целые (неповрежденные) эритроциты появляются на реагентной зоне в виде зеленых точек.

Примечание – Повышенный удельный вес или повышенная концентрация белка может снизить реактивность теста.

Клинико-диагностическое значение: В норме кровь в моче отсутствует. Появление крови с форменными элементами в моче – гематурия; появление в моче кровяных пигментов (гемоглобина и метгемоглобина) – гемоглобинурия. При гематурии моча непрозрачна, имеет красноватый оттенок; при гемоглобинурии моча чаще окрашена в кофейно-бурый цвет. В случае гематурии и гемоглобинурии в моче содержится белок. Гематурии подразделяются на почечные и внепочечные. Почечная гематурия – основной симптом острого нефрита (сопровождается гемоглобинурией). Внепочечные гематурии связаны с воспалительными процессами и травмами мочевых путей (мочевые камни, рак мочевого пузыря, цистит). Гемоглобинурия отмечается при отравлении гемолитическими ядами, тяжелых инфекциях, ожогах, при которых происходит разрушение (гемолиз и связанная с ним гемоглобинемия) эритроцитов.

9 Определение содержания лейкоцитов в моче

Принцип метода. Переход окраски индикаторной зоны от бежевой через серую к сиреневой и далее фиолетовой свидетельствует о пропорциональном увеличении числа лейкоцитов в моче, соответствующим шкале [15 (следы) – 70 – 125 – 500 лейкоцитов/мкл].

Состав реагентной зоны: 0,4 % производного пиррола аминокислотного; 0,2 % соли диазония; 40,9 % буфера; 58,5 % нереактивных элементов.

Границы чувствительности – 5–15 лейкоцитов/поле.

Диапазон чувствительности – 15–500 лейкоцитов/мкл.

Примечание – Повышенная концентрация глюкозы, щавелевой кислоты, медикаментов (цефалексин, цефалотин, тетрациклин) приводит к ослаблению реакции. Сильно окрашенные пробы мочи могут повлиять на цвет реагентной зоны. Иногда у пациентов женского пола позитивный результат может быть вызван примесями вагинальных выделений в моче.

Клинико-диагностическое значение. В норме моча не содержит лейкоцитов (до 10 в одном микролитре). Лейкоциты мочи представлены главным образом нейтрофилами, но могут быть обнаружены эозинофилы и лимфоциты. Увеличение числа лейкоцитов в моче (лейкоцитурия) до очень больших количеств (пиурия) свидетельствует о воспалительных процессах в почках и мочевыводящих путях (туберкулез почки, пиелиты, циститы, пиелонефриты).

10 Определение плотности мочи

Принцип метода. Тест основан на pKs (показатель эмпирической константы высаливания) – изменении различных электролитов в зависимости от концентрации (определяющей ионную силу) ионов в моче.

Состав реагентной зоны: 2,8 % бромотимолового голубого; 97,2 % поли-(метил-, винил-, эфир-малеиновой кислоты натриевая соль).

Диапазон чувствительности – 1,000–1,030 г/л. Изменение окраски от сине-зеленой через морскую, зеленую, защитную, травяную, хаки до охристой.

Примечание – При уровне pH мочи выше 6,5 результат увеличивается на 0,005. Повышенное значение плотности может быть вызвано присутствием небольшого количества (1–7,5 г/л) белка в моче.

Клинико-диагностическое значение: Плотность мочи в норме колеблется в широких пределах (1,002–1,035 г/л). Она зависит от количества растворенных в ней веществ и количества выделяемой мочи, с одной стороны, и от соотношения количества жидкости, поступившей в организм и выведенной из организма внепочечными путями (потоотделение, диарея и т. п.) – с другой.

Плотность мочи дает представление о приблизительном количестве о растворенных в ней веществ. Ориентировочно расчет плотного остатка (в г/л) получают, умножив 2 последние цифры (сотые и тысячные доли единицы) относительной плотности на коэффициент 2,6. В норме с мочой выделяется 50–75 г/сут плотных веществ. (В норме чем больше объем выделяемой мочи, тем меньше ее плотность и наоборот).

Изостенурия – выделение мочи с постоянной плотностью, равной плотности первичной мочи (1,010 г/л) – свидетельствует о почечной недостаточности. Постоянно низкое значение плотности мочи – гипоизостенурия – указывает на нарушения концентрационной функции почек (хронический нефрит, первично или вторично сморщенная почка). При несахарном диабете резко снижается плотность мочи, что связано с нарушением обратной реабсорбции воды.

При лихорадочных состояниях, общем венозном застое отмечается увеличение плотности и уменьшение объема выделяемой мочи. Сахарный диабет приводит к несоответствию между количеством мочи (наблюдается полиурия) и ее плотностью, повышенной из-за присутствия больших концен­траций глюкозы и кетоновых тел.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ. Оформление результатов исследования проводится по следующей форме:

Клинический анализ мочи.

Ф. И. О. исследуемого ________________________ Пол______ Дата анализа____________

Общий вывод. Делается запись об освоении данного метода анализа и предположительный диагноз, поставленный на основе полученных результатов анализа мочи.

Рекомендуемая литература

Основная

1 Материал лекций.

2 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 473–487; 1998. С. 608–624.

3 Николаев А. Я. Биохимия. М.: Высшая школа, 1989. С. 358–368.

Дополнительная

4 Уайт А. и др. Основы биохимии. Т. 3. М.: Мир, 1981.

5 Наточин Ю. В. Основы физиологии почки. Л.: Медицина, 1982.

6 Почки и гомеостаз в норме и при патологии. М.: Медицина, 1987.